[发明专利]一种嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶及制备方法

说明书

本发明涉及生物化学技术领域，具体涉及一种嗜热型7α‑羟基类固醇脱氢酶及制备方法，包括嗜热型7α‑羟基类固醇脱氢的酶蛋白序列如SEQ ID NO.1所示，本发明所述的首个嗜热型7α‑羟基类固醇脱氢酶的最适催化温度为75℃，显著高于目前已报道的嗜温型酶，解决了现有的7α‑羟基类固醇脱氢酶的热稳定性差的问题。

技术领域

本发明涉及生物化学技术领域，尤其涉及一种嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶及制备方法。

背景技术

7α-、7β-羟基类固醇脱氢酶(Hydroxysteroid dehydrogenase，HSDH)可以偶联催化游离态或结合态甾体类底物C7位羟基的差向异构，是生物转化制备牛磺熊去氧胆酸(Tauroursodeoxycholic acid，TUDCA)的关键生物催化剂。

目前，现有技术公开的7α-羟基类固醇脱氢酶均为嗜温酶，特征是对温度敏感，热稳定性差。因此，发现嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的在于提供一种嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶及制备方法，旨在解决现有的7α-羟基类固醇脱氢酶的热稳定性差的问题。

为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶，所述嗜热型7α-羟基类固醇脱氢的酶蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。

其中，所述7α-羟基类固醇脱氢酶的编码基因如SEQ ID NO.2所示。

第二方面，本发明提供了一种表达盒，包含第一方面所述的嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶。

第三方面，本发明提供了一种表达载体，包含第一方面所述的嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶。

第四方面，本发明提供了一种重组细胞，包含第三方面所述的表达盒。

第五方面，本发明提供了一种嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶的制备方法，能够成功诱导蛋白表达条件下培养第四方面所述的重组细胞并分离得到7α-羟基类固醇脱氢酶。

第六方面，本发明提供了一种催化剂，包含第一方面所述的嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶。

第七方面，本发明提供了一种实现化学物质生物转化的方法，包含第一方面所述的嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶，或包含第七方面所述的催化剂与底物反应的酶促反应。

本发明的一种嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶及制备方法，通过嗜热型7α-羟基类固醇脱氢的酶蛋白序列如SEQ ID NO.1所示，本发明的首个嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶的最适催化温度为75℃，显著高于目前已报道的嗜温型酶，解决了现有的7α-羟基类固醇脱氢酶的热稳定性差的问题。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明提供的一种嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶的SDS-PAGE分析图。

图2是本发明提供的一种嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶的最适温度测定结果图。

图3是本发明提供的一种嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶的制备方法的流程图。

图4是本发明提供的一种嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶的应用的流程图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。