[发明专利]用于检测呼吸道感染性疾病病原体的多重qPCR检测试剂

说明书

本发明公开了一种用于检测呼吸道感染性疾病病原体的多重qPCR检测试剂，其包括检测EB病毒、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、肺炎链球菌、卡他莫拉菌、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、乙型流感病毒的特异性引物和探针；本发明利用实时荧光定量PCR技术对病原体靶基因进行检测；该方法具有耗时短、特异性高、成本低，一次可检测多种病原体的优点，为呼吸道感染性疾病病原体的检测提供了便捷方法，对呼吸道感染患者临床早期分子诊断具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种检测9种呼吸道感染性疾病病原体的特异性引物和探针，本发明利用多重实时荧光定量PCR技术检测呼吸道感染性疾病病原体。

背景技术

病原微生物入侵呼吸道进行繁殖而诱发疾病称为呼吸道感染（RespiratoryTract Infection，RTI）。呼吸道感染可引起普通感冒、急性病毒性咽炎、喉炎、急性支气管炎、急性毛细支气管炎以及肺炎等临床症状；同时，呼吸道感染是主要致死性疾病。世界范围内，急性下呼吸道感染是导致5岁以下儿童死亡的首要原因，远远高于腹泻和意外窒息等其他死因。病毒、细菌、真菌、支原体、衣原体等多种病原微生物可引起呼吸道感染。

临床上多发的病毒有呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）、流感病毒（Influenza virus，IFV）、鼻病毒(Human rhinovirus，HRV)、巨细胞病毒(Humancytomegalovirus，HCMV)、EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）等。而细菌集中于肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae，SP）、流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae，HI）、卡他莫拉菌（Moraxella catarrhalis，MC）等。此外肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，MP）等同样可引起呼吸道感染。

早期及时准确的诊断有助于临床正确合理用药，帮助患者尽早恢复健康，减少病死率。细菌、病毒培养分离法作为临床病原体检测方法之一，其检出率低、耗费时间长，无法满足大量临床样本的检测需求；NGS测序技术主要应用于非典型病原体的检测，当前存在成本高、耗时长、容易污染等不足；基于抗原抗体反应原理的免疫学方法交叉反应易出现假阳性；基因芯片技术及数字PCR技术为新兴分子生物学检测方法，当面面临费用较高且容易污染、生产标准化等问题；环介导等温扩增技术引物设计要求较高，难以实现多种病原体高通量检测；PCR结合Sanger测序技术虽然特异性高，但其检测较为耗时，通量较低，往往不适合临床即时诊断。

实时荧光定量PCR（Real-time fluoroscopy quantitative PCR，qPCR）技术首先被美国ABI（Applied Biosystems）公司推上市场，在此后的20多年迅速发展被广泛应用。多重荧光定量PCR技术在呼吸道感染性疾病病原体检方面具有特异性强、灵敏度高、操作简单、时间短、成本低廉，适合人群大量样本筛查等众多优势。

发明内容

本发明应用靶向病原体基因组保守区扩增和多重实时荧光定量PCR技术，提供了一种用于检测呼吸道感染性疾病病原体的多重qPCR检测试剂，其包括用于检测9种呼吸道感染性疾病病原体的特异性引物和探针，还包括多重qPCR检测其他常规检测试剂，该方法以人呼吸道上皮细胞核糖核酸酶P（RNP）为内参，通过该方法，可实现对呼吸道样本的高通量检测，具有简便、快速、准确和经济等特点，为呼吸道病原体临床早期诊断检测提供了新途径。