[发明专利]一种谷胱甘肽还原酶测定试剂盒

说明书

本发明公开了一种谷胱甘肽还原酶测定试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2，其特征在于所述试剂R1包括Tris缓冲液、抗坏血酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、亚铁氰化钾、氧化型谷胱甘肽GSSG、MgCl₂和烷基糖苷；所述试剂R2包括：Tris缓冲液、NADPH和烷基糖苷。本发明通过谷胱甘肽还原酶测定试剂盒的试剂R1以及试剂R2中添加烷基糖苷，该试剂盒稳定性好、线性范围广，能够实现谷胱甘肽还原酶的准确测定，适于临床应用及推广。

技术领域

本发明属于生化检测技术领域，具体涉及一种谷胱甘肽还原酶测定试剂盒。

背景技术

谷胱甘肽还原酶(GR)是一种黄素酶，每分子酶蛋白含有一分子的FAD。由辅酶NADPH供氢，催化氧化型谷胱甘肽(GSSG)，还原成还原型谷胱甘肽(GSH)。还原型谷胱甘肽(GSH)可使含巯基(-SH)的酶处于还原状态及活性状态，维持红细胞膜的完整性，防止血红蛋白氧化。GR在机体内活性强弱，依次为肝、肾、胰、心、甲状腺、红细胞和血浆。GR定位于微粒体及细胞液部分。因各脏器的组织细胞普遍含有GR，因而GR在机体氧化还原反应中起了举足轻重的地位。

在正常机体代谢过程中，机体存在有效的抗氧化防御系统，不断产生的氧自由基在抗氧化系统的作用下不断地被清除，从而维持生理水平的浓度。抗氧化系统包括细胞内抗氧化酶系统和非酶性的抗氧化剂，其中最主要的是谷胱甘肽抗氧化物酶系统。谷胱甘肽抗氧化物酶系统主要包括谷胱甘肽(GSH)，谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)，谷胱甘肽还原酶(GR)，谷胱甘肽巯基转移酶(GST)。谷胱甘肽是人类细胞中自然合成的，主要在肝内合成，由谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸组成的小分子三肽化合物，是细胞内主要的非蛋白质巯基化合物。在细胞内正常环境下以硫醇还原性(GSH)存在，还原型是其主要的活性状态，大约占95％；氧化型谷胱甘肽(GSSG)是非活性状态，约占1％。内源性GSH主要存在于胞浆内，由γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶催化合成。GSH含有的巯基是其发挥主要作用的基团。在许多生命活动包括基因表达调控、酶活性和代谢调节、对细胞的保护、氨基酸转运、免疫功能调节等起着直接或间接的作用。氧化应激或亲电化合物攻击可使细胞内GSH含量下降，或使其转变为双硫氧化性(GSSG)。GR是一种黄素蛋白氧化还原酶，以还原性辅酶Ⅱ为供氢体，能催化GSSG还原成GSH，对于维持生物体GSH和GSSG比的稳定、保持体内氧自由基平衡起着重要作用。GPX可以特异的催化GSH对过氧化氢的还原反应，起到保护细胞膜结构和功能完整的作用，而且能够使脂质过氧化物变成无毒的羟化物。GST在GPX活力低下的条件下，具有清除体内氧自由基的功能，同时能使有害的亲电物质与GSH结合，将其排出体外，从而起到保护体内蛋白质和核酸等的功能。

目前，测定谷胱甘肽还原酶的方法主要有Elisa法和紫外酶法，前者需要手工操作，耗时较长，步骤繁琐，成本较高，后者步骤简单，成本较低，被广泛推广应用。后者的检测原理在于：本谷胱甘肽还原酶(GR)催化氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，同时还原型辅酶Ⅱ(NADPH)被氧化成为辅酶Ⅱ(NADP⁺)。NADPH在波长340nm有特异吸收峰，其氧化的速率与血清中GR的活性成正比，在340nm处测定NADPH吸光度下降的速率，即可计算出GR活性。为了提高紫外酶法谷胱甘肽还原酶测定试剂盒检测的准确度和保存稳定性，通常需要加入大量的防腐剂、表面活性剂和稳定剂。

例如，中国授权专利CN108828215B公开了一种谷胱甘肽还原酶测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：Tris缓冲液50-200mmol/L、EDTA 0.5-2mmol/L、丙酮酸羧化酶1-5KU/L、抗坏血酸氧化酶1-5KU/L、亚铁氰化钾5-20mg/L、表面活性剂、防腐剂；试剂R2中含有以下成分：Tris缓冲液50-200mmol/L、EDTA 0.5-2mmol/L、GSSG2-10mmol/L、NADPH 0.1-0.5mmol/L、稳定剂1-15g/L、防腐剂0.5-2g/L。该试剂盒是一种稳定性强，抗干扰能力强的液体试剂盒。