[发明专利]胶原基DPP-IV抑制肽的制备方法及胶原基DPP-IV抑制肽

权利要求书

1.胶原基DPP-IV抑制肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、将冻干胶原蛋白用乙酸溶解，使胶原蛋白浓度为4～10mg/mL，在25±2℃下用磁力搅拌器搅拌10～30min后，将疏敏性离子液体按照疏敏性离子液体体积与冻干胶原蛋白质量比4:10加入胶原蛋白溶液中，再在25～37℃下采用梯度升温结合平板翻转振荡法搅拌1～3h，4500g离心10～30min，收集上清液，旋蒸，然后加入无水乙醇洗涤、离心，重复无水乙醇洗涤、离心操作，直至离心上清液中用Folin-phenol试剂检测不到疏敏性离子液体，最后将脱除疏敏性离子液体后的胶原蛋白样品进行冷冻干燥，得疏敏性胶原蛋白；

步骤二、将疏敏性胶原蛋白用乙酸复溶后，用间歇式超声波处理，得超声波修饰后的胶原蛋白；

步骤三、将超声波修饰后的胶原蛋白用去离子水复溶后，用木瓜蛋白酶进行酶解处理，水解物离心、冷冻干燥，即得；其中，

所述疏敏性离子液体为[EMIM][Ac]；

所述梯度升温具体包括一次升温至25±1℃维持30±5min，二次升温至30±1℃维持30±5min，三次升温至37±1℃维持60±5min。

2.如权利要求1所述的胶原基DPP-IV抑制肽的制备方法，其特征在于，步骤二中，将疏敏性胶原蛋白用乙酸复溶至浓度为4～10mg/mL，在25±2℃下用磁力搅拌器搅拌10～30min，再用超声波交替处理胶原蛋白溶液，超声波功率为400±100W，超声时间为20±10min，处理模式为2秒运行和2秒停止交替进行，处理后冷冻干燥，得超声波修饰后的胶原蛋白。

3.如权利要求1所述的胶原基DPP-IV抑制肽的制备方法，其特征在于，步骤三中，将超声波修饰后的胶原蛋白用去离子水复溶至浓度为4～10mg/mL，加入超声波修饰后的胶原蛋白质量的2～4％的木瓜蛋白酶，控制酶解pH为7～8，酶解温度为40～50℃，酶解时间为2～4h，水解物采用超滤离心管分级，截留分子量为0～3KDa，离心力为4000～6000g，离心时间为10～20min，将不同分子量的胶原水解物冷冻干燥，得不同分子量的胶原基DPP-IV抑制肽。