[发明专利]一种生物传感集成UPLC-MS技术的止咳关键质量属性辨识方法

说明书

本发明提供生物传感芯片集成UPLC‑MS技术的中药关键质量属性辨识方法及其在小儿消积止咳口服液等中药复中的应用。具体包括：(1)以靶标蛋白为研究载体，构建生物传感器；(2)基于步骤1中的生物传感器，采用电化学工作站筛选待测样品与关键蛋白的相互作用强度；(3)采用靶蛋白的非特异性洗脱剂和特异性洗脱剂，将结合于生物传感器件之上的样品洗脱；(4)富集步骤3中的洗脱液，采用液质联用技术，鉴定待测样品中与生物传感敏感元件结合的物质；(5)将步骤4中检测所得物质与待测物质的全成分进行比对，筛选其关键质量属性。该发明形成一套基于生物传感集成UPLC‑MS技术的中药关键质量属性辨识方法。

技术领域

本发明属于中药领域，具体涉及一种生物传感集成UPLC-MS技术的关键质量属性辨识方法及其在小儿消积止咳口服液止咳关键质量属性辨识中的应用。

背景技术

《人用药物注册技术要求国际协调委员会药物研发指导原则》(ICHQ8)中明确指出药品关键质量属性(critical quality attributes，CQAs)是指在适当的限度、范围或分布之内，确保所需产品质量的物理、化学、生物或微生物性质或特征。其中以临床疗效为指导的功效关键质量属性是中药及其制剂质量评价和控制的前提基础。然而，目前中药行业普遍存在质量评价和过程控制指标与临床疗效缺乏关联的行业痛点难题。

基于中药体系复杂的特点，采用传统检测技术进行功效关键质量属性辨识研究时，还存在着检测限较高、分离手段较复杂、干扰因素较多、分析相对复杂和无法直接与临床功效相结合等不足。以功效为导向的生物传感器作为当今前沿的分析技术，通过与换能器直接接触的生物识别元件，为功效关联的关键质量属性的辨识研究提供关键技术支撑。基于半导体材料制备的AlGaAs/GaAs高电子迁移率晶体管(HEMT)生物传感器，因其灵敏度高，检测速度更快，易于集成可批量生产，生物兼容性非常突出可进行生物功能化修饰，在分子识别领域得到广泛应用，检测限能达到pg级。对于其筛选所得物质，超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)以其高效的色谱分离性能、更短的分析时间，具有更好的定量和鉴定能力，为生物传感筛选所得化学成分的分离、鉴定提供了重要技术支撑。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种生物传感集成UPLC-MS技术的止咳关键质量属性辨识方法。

本发明的另一目的在于提供所述生物传感集成UPLC-MS技术的关键质量属性辨识方法在小儿消积止咳口服液止咳关键质量属性辨识中的应用。

为了克服现有技术的不足，本发明首先提供一种潜在性味关键质量属性辨识方法，其具体步骤如下：

步骤1：以靶标蛋白为研究载体，构建生物传感器；

步骤2：基于步骤1中的生物传感器，采用电化学工作站筛选待测样品与关键蛋白的相互作用强度；

步骤3：采用靶标蛋白的非特异性洗脱剂和特异性洗脱剂，将结合于生物传感器件之上的样品洗脱；

步骤4：富集步骤3中的洗脱液，采用超高效液相色谱质谱联用技术，鉴定待测样品中与生物传感敏感元件结合的物质；

步骤5：将步骤4中检测所得物质与待测物质的全成分进行比对，筛选其关键质量属性。

根据本发明的一些具体实施方案，一种生物传感集成UPLC-MS技术的关键质量属性辨识方法中涉及一种关键靶标蛋白MIF修饰的HEMT生物传感器，构建的具体步骤如下：

(1)将干净的石英玻璃管粘于HEMT器件之上，作为样品池，向样品池中加入3-巯基丙酸，于室温下浸泡24小时，在HEMT器件表面生成Au-S键，形成自组装单层；

(2)洗去(1)中多余的3-巯基丙酸，于样品池中加入20mM的羧基活化剂碳酰二亚胺盐酸盐和50mM N-羟基丁二酰亚胺等体积混合物，生成稳定的胺类活化产物用于活化羧基；