[发明专利]一种猪瘟病毒E2-E0融合蛋白、制备方法及应用

权利要求书

1.一种猪瘟病毒E2-E0融合蛋白，其特征在于，所述E2-E0融合蛋白包括猪瘟病毒E0截短蛋白和猪瘟病毒E2蛋白；所述猪瘟病毒E0截短蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述猪瘟病毒E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.如权利要求1所述的猪瘟病毒E2-E0融合蛋白，其特征在于，所述猪瘟病毒E2-E0融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

3.一种编码权利要求2所述猪瘟病毒E2-E0融合蛋白的基因，其特征在于，所述基因序列如SEQ ID NO.6所示。

4.如权利要求1所述的猪瘟病毒E2-E0融合蛋白，其特征在于，所述猪瘟病毒E0截短蛋白的第160位、162位、165位和166位氨基酸均突变为甘氨酸G；所述突变后的猪瘟病毒E0截短蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

5.如权利要求4所述的猪瘟病毒E2-E0融合蛋白，其特征在于，所述猪瘟病毒E2-E0融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。

6.一种编码权利要求5所述的猪瘟病毒E2-E0融合蛋白的基因序列，其特征在于，所述基因序列如SEQ ID NO.10所示。

7.如权利要求1-2或权利要求4-5任一所述的猪瘟病毒E2-E0融合蛋白在制备猪瘟病毒疫苗中的应用。

8.如权利要求1-2或权利要求4-5任一所述的猪瘟病毒E2-E0融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将编码猪瘟病毒E2-E0融合蛋白的基因克隆到真核表达载体中得到表达猪瘟病毒E2-E0融合蛋白的重组质粒；再将所述的重组质粒转染至CHO细胞中，培养、筛选、纯化得到猪瘟病毒E2-E0融合蛋白。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述真核表达载体为pcDNA3.1载体；所述CHO细胞为CHO悬浮细胞。

10.如权利要9所述的制备方法，其特征在于，所述方法为：

(1)PCR扩增编码猪瘟病毒E2-E0融合蛋白的基因片段，所述基因片段如SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.10所示；

(2)用限制性内切酶Xho I、Hind III分别对载体pcDNA3.1和猪瘟病毒E2-E0融合蛋白的基因片段进行双酶切，并将酶切片段和猪瘟病毒E2-E0融合蛋白的基因片段用DNA连接酶连接，获得表达猪瘟病毒E2-E0融合蛋白的重组质粒；

(3)将步骤(2)所述重组质粒转染CHO悬浮细胞，悬浮培养，收集细胞培养上清，纯化即得猪瘟病毒E2-E0融合蛋白。