[发明专利]一种用于外泌体浓度检测的POCT设备及其检测方法

说明书

本发明提出了一种用于外泌体浓度检测的POCT设备及其检测方法，以解决对宏观的外泌体浓度测定时，使用试剂盒容易丢失整体浓度信息，且现有的外泌体光学浓度检测设备价格昂贵难以普及的问题；包括激光发射器，检测芯片，透镜，水平滤光片和光电二极管A以及磁铁；血浆样品和AptCD63修饰的磁珠在结合腔内发生免疫反应，完成富集操作，然后检测芯片转动时，在磁铁的吸附下，通过预埋有cy5荧光液的洗涤腔，再把AptCD63磁珠‑外泌体复合物移动到检测腔，激光照射在检测腔时，使AptCD63磁珠‑外泌体复合物发出荧光，光电二极管A把检测腔光强信号转换成电信号，并且通过串口把该值输出到电脑上，从而完成浓度检测工作。

技术领域

本发明涉及外泌体检测技术领域，特别是一种用于外泌体浓度检测的 POCT设备及其检测方法。

背景技术

肿瘤是指细胞在致瘤因素作用下，基因发生了改变，失去对其生长的正常调控，导致异常增生所形成的疾病，肿瘤细胞具有组织来源特异性，它决定肿瘤的生物学特点以及每种肿瘤的特殊性，肿瘤细胞每天至少可分泌104 个外泌体，高于正常细胞外泌体的分泌量，因此肿瘤患者体液中外泌体含量高于健康人；

而外泌体又是细胞通过“内吞-融合-外排”等一系列过程主动分泌到体液中粒径为30nm-150nm的胞外囊泡，其中包含外泌体来源细胞的多种信息，总之，其蛋白、RNA和脂肪成分特异，有望在多种疾病的早期诊断中发挥重要作用，因此临床医学对于外泌体的研究具有重大意义，而在外泌体的研究中，光学检测是最常用的手段；

例如：使用德国Particle Metrix的光学检测仪Zetaview和美国 NanoView公司所开发的全自动外泌体荧光检测分析系统检测外泌体的浓度等，上述光学检测设备都是进口产品，订购价格昂贵，且需要精细的养护，损坏后维修的代价也非常高，难以普及应用，同时，这些方法还需利用试剂盒对原血清等载体物质进行处理，以获得特定的外泌体的详细数据；然而对于宏观的外泌体浓度参数测定时，由于外泌体的本质是复杂RNA和蛋白质，因此宏观的外泌体浓度测量无需采用复杂的针对性分离手段，相反的，此番操作不仅会使检测过程复杂困难很多，同时也会丢失整体浓度信息。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明提供一种用于外泌体浓度检测的POCT设备及其检测方法，以解决对宏观的外泌体浓度测定时，使用试剂盒容易丢失整体浓度信息，且现有的外泌体光学浓度检测设备价格昂贵难以普及的问题。

其解决的技术方案是，本发明包括开口朝上的底座，底座底部设有控制器，其特征在于，底座内设有托板，托板上开设有圆孔，圆孔内设有可转动的固定盘，固定盘上拆卸连接有检测芯片，检测芯片内部开设有多个沿其圆周方向均布的检测单元；所述的托板上设有位于固定盘左侧的槽型光耦传感器，固定盘上固定连接有码盘，码盘的外侧端设有挡板，挡板可从槽型光耦传感器上的凹槽内通过；所述的托板上设有激光发射器，激光发射器发出的激光可照射在检测单元上；所述的底座右侧壁上开设有方孔，方孔下侧壁上固定连接有左右方向的导轨，导轨上滑动连接有固定架，固定架上开设有上下贯通的安装孔，安装孔内设有透镜；所述的底座上端设有盖板，盖板上设有上下贯通的圆管，圆管内设有水平滤光片；所述的盖板上固定连接有屏蔽盒，屏蔽盒包括盒体和盒盖，盒体底部设有光电二极管A，光电二极管A可透过水平滤光片和透镜接收检测单元上的荧光。

还包括基于外泌体浓度检测的POCT设备的检测方法，包括如下步骤：

1)把AptCD63修饰的磁珠预埋到检测单元7的结合腔28内；再把植物油液注射到与结合腔28紧邻的油液腔31内；之后把荧光液预埋到检测单元7的洗涤腔29内；再然后把缓冲溶液预埋到检测单元7的检测腔30内；最后再把植物油液注射到与检测腔30紧邻的油液腔31内；

2)把血浆样品注射到结合腔内，使磁珠上修饰的抗体与外泌体上的特异蛋白结合，得到AptCD63磁珠-外泌体复合物；

3)密封所有的添加口，并把检测芯片放置到固定盘上；