[发明专利]用于循环肿瘤细胞捕获和分析的基底制备方法及应用

权利要求书

1.一种用于循环肿瘤细胞捕获和分析的基底制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S1，大尺寸PS微球的单层密堆积膜的制备；

深度清洗玻璃片，对玻璃片进行亲水处理，配置PS微球乙醇混合液，在玻璃片表面滴加水膜，将配好的PS微球乙醇混合液在玻璃片的边角逐滴滴加，微球在水面自组装成单层，自然风干后，即获得玻璃片上的大尺寸PS微球的单层密堆积膜；

步骤S2，提拉转移步骤S1制得的大尺寸PS微球单层密堆积膜至PET膜上；

步骤S3，微米锥阵列基底制备；

将步骤S2所得的PET膜放入反应离子刻蚀机中，进行RIE刻蚀，得到周期性密堆积排列的微米锥阵列基底；

步骤S4，电子束蒸镀金膜；

将制备好的微米锥阵列基底放置入镀金的腔室中进行蒸镀金层，得到表面覆盖有着均匀纳米金膜的SERS微米锥阵列基底；

步骤S5，基底上的适体孵育；

将基底放入特异性适体溶液中，将离心管悬吊在旋涡震荡器边缘，通过与旋涡震荡器的边缘碰撞产生轻微的振荡后，取出用PBS溶液冲洗 2-3次，即得到了孵育上适体的SERS微锥基底。

2.根据权利要求1所述的用于循环肿瘤细胞捕获和分析的基底制备方法，其特征在于，所述的步骤S1包括以下步骤：

步骤S101，使用丙酮、乙醇、浓硫酸、过氧化氢溶液和去离子水配合超声深度清洗玻璃片；

步骤S102，通过氨水、去离子水和过氧化氢溶液对玻璃片进行超声亲水处理；

步骤S103，配置PS微球乙醇混合液：取1 mL的20 μm PS微球混合液，离心后取走600 μL上清液，将PS微球混合液浓缩2.5倍，浓缩后的PS微球混合液和乙醇按3:1混合，配置成PS微球乙醇混合液；

步骤S104，在晾干后玻璃片表面滴加2-3 mm左右的水膜

步骤S105， 将步骤S103配好的PS微球乙醇混合液在玻璃片的边角逐滴滴加，微球在水膜表面自组装成单层；

步骤S106，将无尘布放在玻璃片一角，将多余的水吸走，待自然风干后，即获得了玻璃片上的大尺寸PS微球的单层密堆积膜。

3.根据权利要求1所述的用于循环肿瘤细胞捕获和分析的基底制备方法，其特征在于，所述的步骤S2具体包括：

步骤S201，PET薄膜处理；

将PET薄膜裁剪成合适大小，清洗后放入等离子体清洗机中处理90秒；

将PET薄膜表面均匀涂满聚乙二醇，高温150℃烘25分钟；

取出PET薄膜晾至室温；

用去离子水冲洗6-7次完成亲水处理；

步骤S202，将步骤S1得到的玻璃片以45度角斜插进去离子水面，单层球会脱离玻璃片悬浮在水面上；

步骤S203，滴加表面活性剂，减少水的表面张力，防止单层膜扩散开；

步骤S204，镊子夹住亲水处理后的PET薄膜，在远离PS膜的位置浸没入水中，缓慢移动到单层膜的正下方；

步骤S205，以45度角匀速地慢慢地将PET膜拉出水面，从而将悬浮在水面上的PS微球单层膜转移到PET膜表面；

步骤S206，自然风干后，即得到PET薄膜上的单层密堆积大尺寸PS微球。

4.根据权利要求1所述的用于循环肿瘤细胞捕获和分析的基底制备方法，其特征在于，所述的步骤S3具体为：首先将风干后的带有单层球的PET薄膜放入反应离子刻蚀机中，进行RIE刻蚀，将刻蚀功率调至270 W，打开O₂阀门，将进气气流量调至20 sccm，刻蚀压强调至5Pa，为防止机器过载，分四次刻蚀，每次单独25分钟，中间停5分钟，总刻蚀时间为100分钟；最终得到了周期性密堆积排列具备微纳分级结构的微米锥阵列基底。

5.根据权利要求1所述的用于循环肿瘤细胞捕获和分析的基底制备方法，其特征在于，所述的步骤S4具体为：

将制备好的微米锥阵列基底贴在圆盘上，放置入镀金的腔室中，先抽真空再控制镀金的速度为0.03 nm.s^-1，用膜厚仪来控制基底上的蒸镀金层厚度为100 nm左右，得到表面覆盖有着均匀纳米金膜的SERS微米锥阵列基底。