[发明专利]多粘芽孢杆菌CPL258及其筛选和应用

说明书

本发明公开了一株多粘芽孢杆菌CPL258及其筛选和应用，该菌株CPL258经鉴定为多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)，已保藏于中国典型微生物保藏中心，保藏时间为2021年09月13日，保藏编号为CCTCC NO.M20211157。本发明多粘芽孢杆菌CPL258是一种产芽孢的革兰氏阳性短杆状细菌，可产生具有抑菌作用的抗菌肽类、核苷类物质、抗生素及抗菌蛋白等，且其具有防治动物性埃希氏大肠杆菌导致的猪腹泻，从而增强仔猪免疫力，降低死亡率的作用。综上，本发明多粘芽孢杆菌CPL258在仔猪饲料应用方面具有广阔的前景。

技术领域

本发明属于生物技术应用领域，具体涉及一株多粘芽孢杆菌CPL258及其筛选和应用。

背景技术

多粘芽孢杆菌于2002年被美国环境保护署列为商业应用微生物之一，也是我国农业部规定免做安全鉴定的一级菌种之一。该种属微生物能在不利条件下形成芽孢，即使在苛刻的胃酸环境中也能保持较高的活性，目前在畜禽生产养殖中具有较为广泛的应用。芽孢杆菌能改善畜禽肠道微生态环境，治疗和预防细菌性肠道疾病，提高动物抗病能力，促进动物生长。以猪腹泻疾病为例，已经有饲料添加多种芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等)提高仔猪的抵抗力，维持其肠道平衡的研究报道。

多粘芽孢杆菌代谢产物之一为Colistin，一种多组分碱性多肽类抗生素。本项目发现ColistinA是Colistin的成分之一，它可以用来可用来对抗一些由革兰氏阴性菌引起的感染。Colistin A的分子结构如下所示，它的结构主要由三部分组成，环状7肽包括:4个L-Dab，1个L-Leu,1个L-Thr，1个D-Leu；线性3肽包括:2个L-Dab，1个L-Thr；疏水酰基尾包括:甲基辛酸，异辛酸。分子量约为1169.5g/mol。相对于传统的抗生素，Colistin A具有更高的稳定性，但是Colistin A的产量很低，如何高效生产Colistin A是继续解决的问题。

Colistin A如下所示：

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一株产抗细菌代谢产物的菌株多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CPL258，本发明筛选到的多粘芽孢杆菌CPL258可以高产Colistin A，对于猪腹泻埃希氏大肠杆菌疾病具有非常好的效果。

本发明还提供所述多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CPL258的筛选方法和应用。

技术方案：为了实现上述目的，本发明所述一株多粘芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)CPL258，已保藏于中国典型微生物保藏中心，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，保藏时间为2021年09月13日，保藏编号为CCTCCNO.M20211157。该菌株来源于淮安市水产养殖所附近土壤中，在LB培养基上菌落形态为圆形、表面光滑、稍凸起、边缘不整齐、乳白色、不透明。

本发明所述多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CPL258是一种产芽孢的革兰氏阳性细菌，可产生具有抑菌作用的肽类、核苷类物质、抗生素及抗菌蛋白等；对金黄色葡萄球菌、埃希氏大肠杆菌、鰤鱼诺卡氏菌具有抑制作用。

本发明所述的多粘芽孢杆菌CPL258的筛选方法，包括如下步骤：

(1)取土壤样品与生理盐水混匀，热处理后加入NaCl，水浴后取土壤悬液用无菌水稀释；

(2)取稀释后的稀释液滴加在LB固体培养基上，涂布均匀，培养得到初筛菌株，以分离筛选得到的初筛菌株为供试菌；

(3)以金黄色葡萄球菌为指示菌，采用牛津杯法筛选出具有金黄色葡萄球菌拮抗效果多粘芽孢杆菌CPL258。

作为优选，本发明所述的多粘芽孢杆菌CPL258的筛选，包括如下步骤：