[发明专利]异源二聚体多特异性抗体形式

权利要求书

1.一种异源二聚体蛋白，其包含第一和第二单链蛋白，

其中，所述第一单链蛋白包含第一氨基酸序列，所述第一氨基酸序列由以下组成(从N末端至C末端)：

(ia)第一VL结构域；

(iia)第一多肽接头，

(iiia)第二VL结构域，

(iva)任选地，通过第三多肽接头与所述第一VL结构域融合的第一scFv片段，和

(va)任选地，通过第四多肽接头与所述第二VL结构域融合的第二scFv片段，并且

其中所述第二单链蛋白包含第二氨基酸序列，所述第二氨基酸序列由以下组成(从N末端至C末端)：

(ib)第一VH结构域；

(iib)第二多肽接头，

(iiib)第二VH结构域，

(ivb)任选地，通过第五多肽接头与所述第一VH结构域融合的第三scFv片段，和

(vb)任选地，通过第六多肽接头与所述第二VH结构域融合的第四scFv片段，

条件是所述第一、第二、第三和第四scFv片段中的至少一个存在，

其中所述第一VL结构域与所述第一或所述第二VH结构域形成可变结构域第一同源对，其对第一靶标抗原具有特异性，并且所述第二VL结构域与另一个所述VH结构域形成可变结构域第二同源对，其对第二靶标抗原具有特异性，并且

其中所述VL结构域中的至少一个包含(i)人Vκ框架区域I至III；(ii)CDR结构域CDR1、CDR2和CDR3；(iii)框架区域IV，其是基于人Vλ的序列，其与框架区IV最接近的人λ种系序列相比具有一个或两个突变，特别是一个突变。

2.权利要求1所述的异源二聚体蛋白，其中

(a)所述第一、第二、第三和第四scFv片段中的第二个存在；

(b)所述第一、第二、第三和第四scFv片段的第二个和第三个存在；或

(c)所述第一、第二、第三和第四scFv片段都存在。

3.权利要求1或2所述的异源二聚体蛋白，其中所述第一多肽接头由5至20个氨基酸残基组成，特别是由6至15个氨基酸残基组成。

4.权利要求1-3任一项所述的异源二聚体蛋白，其中(a)所述第一VL结构域(ia)与所述第一VH结构域(ib)形成可变结构域第一同源对，其对第一靶标抗原具有特异性，并且所述第二VL结构域(iia)与所述第二VH结构域(iib)形成可变结构域第二同源对，其对第二靶标抗原具有特异性；或者(b)所述第一VL结构域(ia)与所述第二VH结构域(iib)形成可变结构域第一同源对，其对第一靶标抗原具有特异性，并且所述第二VL结构域(iia)与所述第一VH结构域(ib)形成可变结构域第二同源对，其对第二靶标抗原具有特异性。

5.权利要求1-4任一项所述的异源二聚体蛋白，其中所述VL、VH或scFv结构域中的至少一个包含源自亲本兔抗体的CDR区域。

6.权利要求1-5任一项所述的异源二聚体蛋白，其中，所述第一和所述第二VL和VH结构域之一的同源对对于选自以下的抗原是特异性的：癌症靶标；和存在于免疫效应细胞上的靶标，特别是CD3。

7.编码权利要求1-6任一项所述的异源二聚体蛋白的第一和第二单链蛋白的核酸序列或两种核酸序列。

8.包含权利要求7所述的核酸序列或两个核酸序列的载体或两种载体。

9.包含权利要求8所述的载体或两种载体的宿主细胞或多种宿主细胞。