[发明专利]一种基于LC-MS/MS检测5种抗肿瘤药物的试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种基于LC‑MS/MS检测生物样本中抗肿瘤药物的试剂盒及方法，属于LC‑MS/MS检测技术领域。所述试剂盒包括外标溶液和内标溶液，所述外标溶液包括甲氨蝶呤、7‑羟基甲氨蝶呤、伊立替康、紫杉醇和多烯紫杉醇，所述内标溶液包括紫杉醇。本发明可用于进行药物监测，制备药物时间监测曲线，通过谷浓度和峰浓度两个时间点进行药物浓度监测，从而能够在提升方法灵敏度和选择性的同时，缩短分析时间以提升分析的通量。

技术领域

本发明属于液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测技术领域，具体地，涉及一种基于LC-MS/MS检测5种抗肿瘤药物的试剂盒和方法。

背景技术

目前全球各个国家或地区已批准上市的抗癌药物大约有130～150种。用这些药物配制成的各种抗癌药物制剂大约有1300～1500种。抗肿瘤药物浓度监测技术广泛应用于临床药物毒理研究，观察药物效果与作用及诊断犯罪。特别是临床毒理研究，通常利用药物浓度监测寻找最佳治疗浓度，同时避免过度剂量的毒性风险。

由于抗肿瘤药物在药代动学上的个体差异明显(年龄，性别，遗传学，身体状况及疾病状况等)，体内血药浓度与临床疗效和不良反应密切相关，检测其血药浓度从而调整剂量，减少不良反应，在临床用药中具有重大意义。

传统方法一般为酶免法或高效液相色谱法，前者存在交叉干扰问题，不能得到准确定量结果，后者存在前处理复杂，最低定量下限较大，分析时间长，消耗大量有机溶剂等问题。并且，传统方法不适用于多种肿瘤药物的同时测量，并且前处理过程比较繁琐复杂，费时费力，以及色谱运行时间较长，不利于大批量临床研究样品的测定。

目前，同时检测多种药物通常采用LC-MS/MS方法，然而，大多数LC-MS/MS方法都采用氘代等内标用来校正基质效应等影响，此类内标成本较高，会直接导致整个方法的成本较高，在同时检测多种药物时，总是会存在多种目标物灵敏度相对较低的问题。另外，现有技术多为一种或2种药物同时测定，通量低，影响了检测的效率。

发明内容

为了解决上述技术问题中的至少一个，本发明旨在将高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)与外标法和内标法相结合，建立一种快速、灵敏的同时测定5种抗肿瘤药物血清的检测试剂盒和方法。为了达到该目的，本发明采取的技术方案如下：

本发明第一方面提供一种基于LC-MS/MS检测生物样本中抗肿瘤药物的试剂盒，包括外标溶液和内标溶液，所述外标溶液包括甲氨蝶呤、7-羟基甲氨蝶呤、伊立替康、紫杉醇和多烯紫杉醇，所述内标溶液包括紫杉醇。

进一步地，所述外标溶液中各标准品的浓度(mg/mL)分别为0.0505～0.101、0.03995～0.0799、0.02815～0.0563、0.0208～0.0416和0.02035～0.0407，所述内标溶液中紫杉醇的浓度为0.0585～0.117μg/mL。

在本发明的一些实施方案中，所述外标溶液中各标准品的浓度(mg/mL)分别为0.101、0.0799、0.0563、0.0416和0.0407，所述内标溶液中紫杉醇的浓度为0.117μg/mL。

本发明的第二方面提供一种基于LC-MS/MS检测生物样本中抗肿瘤药物的方法，包括以下步骤：

S1，利用权利要求1所述的试剂盒中的外标溶液制备标准曲线工作液和质控样品；

S2，在待测生物样本中加入沉淀剂，离心后吸取上清液进行LC-MS/MS检测，

其中，所述沉淀剂为甲醇。

进一步地，步骤S2中，进行LC-MS/MS检测的参数为：

(1)色谱条件：

流动相A：0.01％～0.2％甲酸水溶液；流动相B：0.01％～0.2％甲酸的乙腈：甲醇(1：1，v/v)溶液；