[发明专利]抗人线粒体外膜蛋白OMP25的单克隆抗体及应用

说明书

本发明公开了一种抗人线粒体外膜蛋白OMP25的单克隆抗体及其应用。该单克隆抗体为HC01‑R001，其亚型为IgG1、κ型，能与人线粒体外膜蛋白OMP25的膜外区特异性结合。产生该抗体的杂交瘤细胞是由免疫的BALB/C小鼠脾淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0经融合、筛选、克隆和传代流程筛选后获得的杂交瘤细胞，能稳定分泌HC01‑R001。该蛋白结构和功能较为简单，对线粒体影响较小，序列特异性高，且在不同物种间保守程度较高，是理想的线粒体外膜识别靶标，该抗体用途广泛，可用于人线粒体外膜蛋白的ELISA、Western Blotting、免疫荧光、免疫组化、流式细胞术等检测，以及免疫沉淀实验。

技术领域

本发明属于生物技术及免疫学领域，涉及一种抗人线粒体包膜蛋白OMP25单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体为HC01-R001。

背景技术

线粒体是一种存在于真核细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所。线粒体形状因生物种类和生理状态而异，一般呈短棒状或圆球状，还可呈环状、线状、哑铃状、分杈状、扁盘状或其它形状。线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系，但其基因组大小有限，是一种半自主细胞器。

线粒体由外至内可划分为线粒体外膜、线粒体膜间隙、线粒体内膜和线粒体基质四个功能区。线粒体是真核生物进行氧化代谢的部位，是糖类、脂肪和氨基酸最终氧化释放能量的场所。线粒体负责的最终氧化的共同途径是三羧酸循环与氧化磷酸化。除了合成ATP为细胞提供能量等主要功能外，线粒体还承担了许多其他生理功能，例如储存钙离子，参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期、合成胆固醇及某些血红素的能力。

线粒体结构、形态和功能等的异常与许多疾病的发生发展有关。线粒体在利用氧气制造能量的过程中产生的活性氧自由基会伤害生物体造成氧毒性，是生物体衰老的最原初的原因。人类线粒体出现问题会导致线粒体病，线粒体病是一大类遗传代谢病，主要累计对能量需求较大的组织，包括线粒体肌病、多系统疾病、心肌病、进行性眼外肌麻痹、Leer遗传性视神经病、线粒体肌病、糖尿病、耳聋、共济失调舞蹈病等疾病。近年来，研究发现线粒体与癌细胞转移有关，当肿瘤细胞中线粒体的功能发生改变时就会促进细胞的迁移，最终导致肿瘤成功转移。此外，线粒体介导的线粒体自噬在许多生理和病理过程这发挥了重要作用。

目前许多研究涉及对线粒体形态和功能的检测，线粒体外膜蛋白特异性抗体在这些研究中有重要的作用，可以用于线粒体分离、免疫荧光、免疫组化、流式细胞术等检测技术。由于线粒体外膜蛋白具有重要的生物学功能，而且只有部分结构域位于线粒体外侧，因此，选取哪个线粒体外膜蛋白作为靶点不仅影响线粒体分离和检测的效果，而且影响线粒体的功能。线粒体外膜蛋白OMP25结构和功能较为简单，序列特异性高，且在不同物种间保守程度较高，是理想的线粒体外膜识别靶标。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗线粒体外膜蛋白OMP25的单克隆抗体，该单克隆抗体为HC01-R001，其亚型为IgG1、κ型，能与人线粒体外膜蛋白OMP25的膜外区特异性结合；产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞是由免疫的BALB/C小鼠脾淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0经融合、筛选、克隆和传代流程筛选后获得的杂交瘤细胞，能稳定分泌HC01-R001。所述单克隆抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；重链编码核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链编码核酸分子的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示。

一种根据所述的单克隆抗体HC01-R001的制备方法，通过以下步骤获得：

(1)小鼠免疫：选择6周龄的雄性BALB/C小鼠，以人线粒体外膜蛋白OMP25全蛋白，对小鼠进行免疫；总共免疫3次，分别为第1、21、35天，每次于小鼠大腿内侧注射100μg抗原加等体积佐剂混合物；第38天处理小鼠，用于融合实验；

(2)小鼠骨髓瘤细胞的培养：培养小鼠骨髓瘤细胞SP2/0并使其保持良好的生长状态用于杂交瘤细胞融合；