[发明专利]一种同时鉴定三个松花菜品种的方法及其使用的引物对

说明书

本发明公开了一种同时鉴定京松1号、京松2号和京松3号三个松花菜品种的方法及其使用的引物对。引物对由SEQIDNO:1所示的单链DNA分子和SEQIDNO:2所示的单链DNA分子组成。采用该引物对在幼苗期即可实现三个品种的真伪鉴定。相比传统田间鉴定方法，本发明可以大大缩短时间，还可节省用地、用工、水肥等。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种同时鉴定三个松花菜品种的方法及其使用的引物对。

背景技术

品种鉴定是种子质量检测工作中的一项重要内容，其主要目的是确定送验样品与所声明的品种的符合程度。SSR分子标记技术是一门新兴的技术，它是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记技术，是 DNA水平遗传多态性的直接反映。与其它遗传标记技术相比，SSR分子标记技术具有信息丰富、检测快速准确、易于标准化操作等特点，十分适合用来进行植物品种鉴定和分析。新的《种子法》中明确规定SSR分子标记的方法进行蔬菜品种真实性检测结果可以作为伪劣种子判定的依据。

松花菜，是十字花科芸苔属甘蓝种花椰菜的一个特殊变种，因为其花梗较长、花球较松，口感比传统的紧实型花椰菜更脆、更好，深受消费者喜爱。我国松花菜的栽培面积近十多年随着市场需求的快速增长而不断扩大。相应地，育成和推广的品种也越来越多，其中不乏异名同种的同质化品种，对知识产权的保护构成了严峻的挑战。同时，品种的种子纯度是影响种子质量的重要指标，直接影响产量和经济效益。松花菜具有明显的杂种优势，生产用种子基本都是杂交种，种子生产主要有两条途径：自交不亲和系和雄性不育系。自交不亲和系途径生产的种子，往往会由于亲本的自交不亲和性不够彻底而产生少量的自交种子，种子采收时无法鉴别而混杂在杂交种中造成假杂种。雄性不育系途径生产杂交种，虽然可以克服自交不亲和系途径造成的假杂种，但是种子生产时如果制种田空间隔离不够、花期田间管理不当引起花粉污染，或者在种子采收、晾晒、加工、运输等过程中出现机械混杂，都会直接影响种子纯度。种子纯度不合格，会给种子经营企业和种植户造成巨大的经济损失。因此，进行纯度鉴定，保证种子质量是种子进入市场销售之前必须做的工作。

纯度鉴定传统方法是利用幼苗或者株型等形态差异进行真假杂种的鉴别，松花菜生长周期长，利用传统的形态学鉴定方法花费时间长、成本高，还容易受环境条件和基因显隐性等因素的影响，使得鉴定结果的准确度降低。现代分子生物技术的快速发展，为复杂的多性状在DNA水平进行早期、准确、高效地选择提供了可能。利用分子标记技术进行种子纯度的鉴定，具有快速、高效、易重复、不受环境影响等优势。以 PCR技术为核心的SSR(Simplesequence repeat)分子标记，其位点特异性在基因组中广泛、丰富、均匀地分布，具有共显性、多态性高和重复性好的特点，被应用于植物的遗传多样性分析、遗传图谱构建、分子标记辅助育种及品种鉴定中。虽然SSR分子标记已有应用于品种纯度鉴定，但基本都是一个引物针对一个品种，鉴定多个品种需要开发多个引物，影响成本和效率。

发明内容

本发明的目的为鉴定京松1号、京松2号和京松3号三个品种，以保证松花菜品种的纯度。

本发明首先保护一种鉴定京松1号、京松2号和京松3号三个品种中至少一种的方法，可包括如下步骤：以待测松花菜的基因组DNA为模板，采用引物对CH19-20 进行PCR扩增，检测，然后进行如下判断：

如果仅得到三种扩增片段且大小分别为264bp、286bp和310bp，则待测松花菜为京松1号；

如果仅得到三种扩增片段且大小分别为269bp、288bp和312bp，则待测松花菜为京松2号；

如果仅得到两种扩增片段且大小分别为298bp和267bp，则待测松花菜为京松3号；

所述引物对CH19-20由上游引物和下游引物组成；

上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。