[发明专利]一种壳聚糖结合域氨基酸序列的应用及酿酒酵母孢子固定化酶的方法

权利要求书

1.一种壳聚糖结合域氨基酸序列的应用，其特征在于：所述应用为利用所述壳聚糖结合域氨基酸序列在酿酒酵母孢子固定化酶中的应用，所述壳聚糖结合域氨基酸序列如SEQID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的壳聚糖结合域氨基酸序列的应用，其特征在于：所述壳聚糖结合域氨基酸序列来源于Paenibacilus sp.IK-5壳聚糖酶的壳聚糖结合区域。

3.如权利要求1或2所述的壳聚糖结合域氨基酸序列的应用，其特征在于：所述在酿酒酵母孢子固定化酶中的应用，利用所述壳聚糖结合域氨基酸序列与酿酒酵母孢子壁壳聚糖层的亲和能力，将目的酶与所述壳聚糖结合域氨基酸序列融合表达在酿酒酵母孢子中。

4.如权利要求3所述的壳聚糖结合域氨基酸序列的应用，其特征在于：所述酿酒酵母孢子为酿酒酵母缺陷型菌株dit1Δ的孢子。

5.一种酿酒酵母孢子固定化酶的方法，其特征在于：包括，

将目的酶基因构建在含有如权利要求1所述的壳聚糖结合域氨基酸序列的表达质粒中，得到重组质粒；

将重组质粒转化到酿酒酵母缺陷型菌株dit1Δ中，得到酵母菌株；

对得到的酵母菌株利用二倍体酵母诱导产孢得到孢子固定化目的酶。

6.如权利要求5所述的酿酒酵母孢子固定化酶的方法，其特征在于：所述目的酶基因为α-半乳糖苷酶基因。

7.如权利要求5或6所述的酿酒酵母孢子固定化酶的方法，其特征在于：所述表达质粒为酿酒酵母质粒pRS426。

8.如权利要求7所述的酿酒酵母孢子固定化酶的方法，其特征在于：还包括对诱导产孢后的孢子进行纯化的方法。

9.如权利要求8所述的酿酒酵母孢子固定化酶的方法，其特征在于：所述对诱导产孢后的孢子进行纯化，镜检确定酵母菌株产孢情况，低温离心收集孢子，使用灭菌水洗涤两遍后重悬于原生质体缓冲液中，加入溶壁酶摇床处理；超声破碎，镜检获得游离的单个孢子；使用预冷的灭菌水清洗后获得纯化孢子，冷冻干燥，置于-20℃储存。

10.如权利要求5、6、8、9中任一项所述的酿酒酵母孢子固定化酶的方法，其特征在于：所述利用二倍体酵母诱导产孢，挑取平板上的单克隆酵母菌株，接种到SD-Ura液体培养基中，30℃摇床培养15～20h；将菌液转接至摇瓶中，30℃摇床培养24h；离心收集酵母菌体，用2％KAc重悬菌体，于30℃培养48h诱导产孢。