[发明专利]一种稳定过表达SRSF3的RAW 264.7细胞系、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种稳定过表达SRSF3的RAW 264.7细胞系，其特征在于，具有慢病毒载体，SRSF3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的一种稳定过表达SRSF3的RAW 264.7细胞系的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、构建过表达SRSF3的Lenti-Flag-hyg-SRSF3质粒；

步骤二、将步骤一构建的Lenti-Flag-hyg-SRSF3质粒与psPAX2和pMD2.G包装载体构成三质粒表达系统，共转染293T细胞，收集慢病毒并浓缩；

步骤三、以步骤二收集并浓缩的慢病毒转染RAW 264.7巨噬细胞，获得过表达SRSF3基因的稳转细胞株。

3.根据权利要求2所述的一种稳定过表达SRSF3的RAW 264.7细胞系的制备方法，其特征在于，步骤一中，以序列表SEQ ID NO.4所示的Lenti-Flag-hyg载体和SRSF3基因制得Lenti-Flag-hyg-SRSF3目的质粒。

4.根据权利要求3所述的一种稳定过表达SRSF3的RAW 264.7细胞系的制备方法，其特征在于，步骤一中，对SRSF3基因进行PCR扩增、电泳、回收后，将回收的SRSF3基因条带与Lenti-Flag-hyg载体进行双酶切，再次电泳和回收，而后采用连接酶连接。

5.根据权利要求4所述的一种稳定过表达SRSF3的RAW 264.7细胞系的制备方法，其特征在于，步骤一中，采用T4DNA连接酶连接，SRSF3与Lenti-Flag-hyg载体的质量比为10:3～10:10。

6.根据权利要求5所述的一种稳定过表达SRSF3的RAW 264.7细胞系的制备方法，其特征在于，步骤一中，还包括将SRSF3基因和Lenti-Flag-hyg载体的连接产物转化入感受态细胞DH5α中进行表达，而后提取Lenti-Flag-hyg-SRSF3目的质粒。

7.根据权利要求6所述的一种稳定过表达SRSF3的RAW 264.7细胞系的制备方法，其特征在于，步骤二中，Lenti-Flag-hyg-SRSF3目的质粒、psPAX2、pMD2.G质量比为(1～3):2:1。

8.根据权利要求7所述的一种稳定过表达SRSF3的RAW 264.7细胞系的制备方法，其特征在于，步骤三中将慢病毒感染RAW 264.7细胞后，加潮霉素B进行筛选，得到稳定过表达SRSF3的RAW 264.7细胞系。

9.根据权利要求1所述的一种稳定过表达SRSF3的RAW 264.7细胞系的应用，其特征在于，在制备抗炎药物中的应用。

10.根据权利要求1所述的一种稳定过表达SRSF3的RAW 264.7细胞系的应用，其特征在于，在制备自噬抑制剂药物中的应用。