[发明专利]一种耐受牛胆汁的牛黄转化菌筛选培养基、配制方法及应用

说明书

本发明涉及一种微生物筛选用培养基，特别涉及一种用于分离耐受牛胆汁的高效牛黄转化细菌的培养基、配制方法及应用。所述培养基的配方包括如下组分：相对于溶剂用量1000.0ml的量，还含有牛肝提取物100.0g～300.0g、牛肾提取物100.0g～300.0g、蛋白胨5.0g～15.0g、葡萄糖3.0g～5.0g、NaCl 3.0g～5.0g、磷酸氢二钠3.0g～5.0 g、牛胆汁100.0ml～600.0 ml，固体培养基在此基础上添加琼脂10.0g～30.0g，调节pH 6.8～7.5。应用本发明的培养基所分离筛选的菌种具有能够长时间耐受牛胆汁、牛黄转化效率高的特点。

技术领域

本发明涉及一种微生物筛选用培养基，特别涉及一种用于分离耐受牛胆汁的高效牛黄转化细菌的培养基、配制方法及应用。

背景技术

牛黄是牛科动物牛（ Bostaurus domestlcus Gmel）或水牛（ Bubalus bubalisl）在病理状况下于其胆囊或胆管内形成的结石的干燥品，属于名贵中药之一，具有清心、开窍、镇惊、清热、解毒等多种临床功效。我国4500种中成药约有650种含有牛黄，我国牛群中天然牛黄的出现率仅为0.21 %，自然产量十分稀少，自古皆有“药中之贵，莫复过此”之说。上世纪90年代蔡红娇教授首先研制出了体外培育牛黄（CN1022668C，CN1044402A，CN1041105A），并收录于中国药典（2020版）中，它是以牛新鲜胆汁作母液，加入去氧胆酸、胆酸、复合胆红素钙等制成。目前，我国仅有武汉健民大鹏药业有限公司独家生产体外培育牛黄。从其专利文献看，其生产的体外培育需要通过额外添加大量的复合胆红素钙盐与胆酸来满足药典的质量标准，这导致生产成本高昂，成品的市场价格极其昂贵，超过天然牛黄的三分之一，

牛黄是牛的病理性产物，其形成的两个基本条件一是牛胆病原微生物感染，二是异物侵入胆囊。病原微生物作为多酶复合体，其代谢活动可以转化牛胆汁成分为牛黄。现代体外培育牛黄技术是模拟病理条件下牛胆结石形成过程，应用牛胆汁与微生物共培养转化形成，其化学成分与临床功效与天然牛黄相近，多数情况可等同于天然牛黄入药和临床应用。因此，选择高效的牛黄转化菌是体外培育牛黄的关键。但是牛胆汁具有广谱性抑菌作用，多数胆囊细菌不耐受胆汁，不能在胆汁中较长时间的存活，特别是一些高效牛黄转化细菌更是很难存活于胆汁中超过48小时，严重影响牛黄转化效率。目前应用现有文献报道的各类培养基（LB，TSA，BHI等）中，难以筛选出能够在牛胆汁中较长时间存活的菌株，更无法应用这类菌种与牛胆汁共培养发酵生产体外培育牛黄。因此，发明一种能够筛选耐受牛胆汁的高效牛黄转化菌株的特制培养基，是体外培育牛黄发酵生产的核心技术。

发明内容

为攻克体外培育牛黄发酵生产中菌种在发酵牛胆汁中存活时间短，不耐受牛胆汁，牛黄转化效率低的技术难题，本发明提供一种可有效用于筛选能够耐受牛胆汁的高效牛黄转化菌的特制培养基及其配制方法，应用本发明特制培养基所分离筛选的菌种具有能够长时间耐受牛胆汁、牛黄转化效率高的特点。

本发明解决以上技术问题，采用的技术方案如下：

一种耐受牛胆汁的牛黄转化菌筛选培养基，所述培养基的配方包括如下组分：相对于溶剂用量1000.0ml的量，还含有牛肝提取物100.0g～300.0g、牛肾提取物100.0g～300.0g、蛋白胨5.0g～15.0g、葡萄糖3.0g～5.0g、NaCl 3.0g～5.0g、磷酸氢二钠3.0g～5.0g、牛胆汁100.0ml～600.0 ml，固体培养基在此基础上添加琼脂10.0g～30.0g，加水定容至1000.0ml，调节pH 6.8～7.5。