[发明专利]一种人工抗体的制备方法

权利要求书

1.一种人工抗体的制备方法，其特征在于，合成以ACE2中和冠状病毒和靶向递送抗变异毒株共同靶标shRNA的人工抗体，包括分别合成以冠状病毒变异毒株保守基因或变异毒株共有基因为靶标的shRNA和以冠状病毒受体结合域RBD为配体的ACE2，然后将合成的ACE2分别连接到合成的shRNA的正反义链上，构成由ACE2和shRNA组成的人工抗体，使人工抗体通过其ACE2结合病毒S1-RBD从而阻断病毒通过其RBD感染表达ACE2的靶细胞，所构成的“shRNA-ACE2-RBD-病毒”结合物通过ACE2和RBD的结合使shRNA被病毒靶向递送至靶细胞并随着病毒的感染进入靶细胞浆，使shRNA在靶细胞内起广谱抗病毒的RNA干扰作用。

2.根据权利要求1所述的一种人工抗体的制备方法，其特征在于，所述以保守基因为靶标是指用于合成shRNA的siRNA基于数据库记载的各种致病性冠状病毒及其变异毒株的共有基因筛选，使合成的siRNA和/或shRNA靶向干扰所述共有基因，从而起广谱抗变异毒株的作用；所述共有基因包括但不限于超保守基因、保守基因和/或由保守微卫星拼接的基因。

3.根据权利要求1、2所述的一种人工抗体的制备方法，其特征在于，所述合成shRNA包括但不限于首先合成2条互补的约21-25nt的寡核苷酸多肽siRNA以及合成起间隔作用的碱基序列，然后将所合成的siRNA和碱基序列连接成由中间碱基序列间隔成loop环的小发夹shRNA双链，继之在shRNA双链的每条单链上各连接ACE2多肽或RBD多肽。

4.根据权利要求1所述的一种人工抗体的制备方法，其特征在于，所述以变异毒株保守基因或共有基因为靶标的siRNA包括但不限于SEQ ID NO.1～39。

5.根据权利要求1、4所述的一种人工抗体的制备方法，其特征在于，所述以变异毒株保守基因或共有基因为靶标的siRNA包括但不限于SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7～10、SEQ IDNO.16～18、SEQ ID NO.20～22、SEQ ID NO.30～32；所述以变异毒株保守基因或共有基因为靶标的siRNA优选为SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.30。

6.根据权利要求1所述的一种人工抗体的制备方法，其特征在于，所述ACE2包括但不限于第1-740位氨基酸的胞外ACE2、第741-763位氨基酸的跨膜ACE2、第764-805位氨基酸的胞内ACE2、全长ACE2或经氨基酸密码子优化的ACE2及其多肽。

7.根据权利要求1、6所述的一种人工抗体的制备方法，其特征在于，所述人工抗体包括但不限于将所述ACE2分别连接到由SEQ ID NO.1～39合成的siRNA/shRNA所制备的化合物；包括但不限于将由SEQ ID NO.1～39合成的siRNA/shRNA分别插入到所述ACE2多肽中间所制备的化合物；包括但不限于以脂质纳米粒包裹所述化合物制备的siRNA药物。

8.根据权利要求1、7所述的一种人工抗体的制备方法，其特征在于，所述连接或合成包括但不限于将ACE2与shRNA的反义链3'末端、正义链5'末端或3'末端进行连接，包括但不限于以带间隔臂的羧腙键、二硫键、磷酸二酯键、二硫代磷酸脂键、硫醚键、肟键、酰胺键、马来酰亚胺-巯基键的化学偶联或共价偶联进行连接。

9.根据权利要求1、8所述的一种人工抗体的制备方法，其特征在于，所述人工抗体包括但不限于以shRNA的正反义链连接ACE2制备胞外ACE2-shRNA-胞外ACE2、跨膜ACE2-shRNA-跨膜ACE2、胞内ACE2-shRNA-胞内ACE2、全长ACE2-shRNA-全长ACE2，以及将shRNA/siRNA插入到ACE2多肽中间制备跨膜ACE2-shRNA-胞外ACE2、胞内ACE2-shRNA-胞外ACE2。

10.根据权利要求1、9所述的一种人工抗体的制备方法，其特征在于，所述人工抗体包括但不限于2ACE2-shRNA5、2ACE2-shRNA16、2ACE2-shRNA21、2ACE2-shRNA30。