[发明专利]一株串联表达非洲猪瘟病毒P30、P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用

权利要求书

1.一株串联表达非洲猪瘟病毒P30、P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗，其特征在于，所述重组伪狂犬病毒基因工程疫苗中串联表达外源的非洲猪瘟病毒P30、P54基因，缺失伪狂犬病病毒中的gI和gE基因。

2.如权利要求1所述的重组伪狂犬病毒基因工程疫苗，所述重组伪狂犬病毒基因工程疫苗为JS-2012-ΔgI/gE+P3054株。

3.如权利要求1所述的串联表达非洲猪瘟病毒P30、P54基因的重组伪狂犬病毒株，所述病毒株(JS-2012-ΔgI/gE+P3054株)，于2022年4月16日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学保藏中心，其保藏号为CCTCC No:V202230。

4.一种重组伪狂犬病毒基因工程疫苗的制备方法，包括以下步骤：

(1)构建重组载体，设计引物扩增同源重组的左、右重组臂，酶切CMV启动子-EGFP基因片段、SV40 polyA信号序列片段，并将左重组臂-CMV启动子-EGFP基因-SV40 polyA信号序列-右重组臂依序组装于获得了重组转移载体；

(2)提取伪狂犬病毒JS-2012-ΔgI/gE株总DNA，将该总DNA与步骤(1)的重组载体共转染细胞，获得含EGFP荧光标记的重组伪狂犬病毒；

(3)构建携带P30、P54的重组载体，所述重组载体为利用融合的P3054蛋白替换了步骤(1)重组载体中的EGFP基因；

(4)提取步骤(2)获得的重组伪狂犬病毒的总DNA，将该总DNA与步骤(3)的携带P30、P54的重组载体共转染细胞，获得不包含EGFP荧光标记的重组伪狂犬病毒，该重组伪狂犬病毒即为重组伪狂犬病毒基因工程疫苗JS-2012-ΔgI/gE+P3054株。

5.一种疫苗组合物，所述组合物包含与佐剂或药用载体混合的重组伪狂犬病毒基因工程疫苗JS-2012-ΔgI/gE+P3054株。

6.一种如权利要求1所述的重组伪狂犬病毒基因工程疫苗JS-2012-ΔgI/gE+P3054株在制备预防或治疗伪狂犬病及猪瘟的疫苗中的应用。