[发明专利]一种含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白复合丝的制备方法在审
| 申请号： | 202210481243.6 | 申请日： | 2022-05-05 |
| 公开（公告）号： | CN114685687A | 公开（公告）日： | 2022-07-01 |
| 发明（设计）人： | 贡成良;王崇龙;胡小龙;李继杰;朱敏;张星;童新宇;邱群婻 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/866;C12N15/62;C12N7/01;A01K67/033 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 孙周强;陶海锋 |
| 地址： | 215137 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 金丝 织网 蜘蛛 大壶状腺丝 蛋白 复合 制备 方法 | ||
1.一种含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白复合丝的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将重组病毒接种5龄家蚕幼虫，添食桑叶后收集蚕丝，得到含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白复合丝；所述重组病毒含有表达金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白的序列。
2.根据权利要求1所述含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白复合丝的制备方法，其特征在于，添食桑叶时添加抗生素、蜕皮激素。
3.根据权利要求1所述含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白复合丝的制备方法，其特征在于，将重组DNA转染培养细胞，然后培养至细胞发病，取细胞培养上清再次接种培养细胞，然后培养至细胞发病，收集细胞培养上清，得到重组病毒；所述重组DNA含有表达金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白的序列。
4.根据权利要求3所述含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白复合丝的制备方法，其特征在于，将重组质粒转化DH10Ac大肠杆菌，后涂布于LB琼脂培养基平板上，然后培养，再挑取白色菌落，提取重组DNA；所述DH10Ac大肠杆菌含有AcBacmid；所述重组质粒含有表达金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白的序列。
5.根据权利要求4所述含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白复合丝的制备方法，其特征在于，所述LB琼脂培养基含有四环素、卡那霉素、庆大霉素、IPTG和X-gal。
6.根据权利要求4所述含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白复合丝的制备方法，其特征在于，将含有表达金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白序列的DNA片段克隆入质粒，得到重组质粒。
7. 根据权利要求6所述含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白复合丝的制备方法，其特征在于，所述含有表达金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白序列的DNA片段的序列为SEQ ID NO: 1；所述质粒为pFAST-Bac-Dual。
8.根据权利要求1所述含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白复合丝的制备方法，其特征在于，重组病毒接种5龄家蚕幼虫的量为104～108拷贝/蚕。
9. 如SEQ ID NO: 1所述的DNA片段在制备含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白复合丝中的应用。
10.根据权利要求1所述含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白复合丝的制备方法制备的复合丝。
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