[发明专利]一种用于生产黄粉虫抗菌肽的发酵制备方法

说明书

本发明公开了一种用于黄粉虫抗菌肽的发酵制备方法，通过选用最适碳源、最适氮源、最适无机盐以及最适无机盐组合的优化筛选基础上进行了培养基成分响应面试验，最终确定了发酵培养基的最佳组成。在确定了最佳培养基的配方组成后进一步对显著影响发酵产物中基因工程菌活菌数及发酵周期的培养温度、初始pH值、接种量的参数进行了优化。本发明采用优化后最佳培养基以及所优选的最适发酵培养条件对基因工程菌进行发酵培养，与常规方法相比较，本申请提供的用于黄粉虫抗菌肽的发酵制备方法发酵后获得的黄粉虫抗菌肽与常规方法相比较提升了2.2倍。

技术领域

本发明属于生物发酵技术领域，具体的涉及抗菌肽的发酵制备的技术领域，更具体的涉及于生产黄粉虫抗菌肽的发酵制备方法的技术领域。

技术背景

目前，全球抗生素药物的滥用，越来越多的细菌可能发展成为对传统抗生素耐药的菌株，因此，人们迫切地寻找能够代替传统抗生素的药物，致使抗菌肽的研究受到广泛重视。全球许多科研人员都在致力于抗菌肽作用机制、药物疗效、安全性等的研究。昆虫是地球上种类最多、数量最大的生物类群，其防御系统独特，当受到某些物理刺激或微生物感染后，会引起免疫反应，产生一系列抗菌物质，其中最重要的是抗菌肽。昆虫抗菌肽种类繁多，不同的诱导和分离方法均有可能获得不同的抗菌肽。另外，昆虫抗菌肽还能选择性地迅速杀灭耐药性细菌，并且在动物机体的免疫反应和维持稳态中发挥着多种功能。

黄粉虫(Tenebrio molitor Linnaeus)，别名黄粉甲、大黄粉虫，俗称面包虫，属于鞘翅目拟步甲科拟步甲属，是目前饲养量较大的一种资源性昆虫，饲养简单，抗病力强，作为优质蛋白替换鱼粉添加到饲料中不仅能促进动物生长而且还增强抗病能力和提高免疫力等。

近年来，国内针对黄粉虫抗菌肽的诱导条件、分离纯化、对靶细胞的作用机制及其基因克隆等方面已经有一些研究，但目前的现有技术对于黄粉虫抗菌肽的制备多停留在实验室阶段，但是采用现有的发酵培养基和发酵条件对相关工程菌株进行发酵培养，发酵产物中活菌数较低，对如何采用适当的发酵条件获得活菌数高，诱导产生高浓度、高活性抗菌肽的相关技术方案未见报道，

发明内容

针对现有技术中黄粉虫抗菌肽的制备批量化生产过程中的发酵不稳定，扩大化培养制备获得的抗菌肽活性较低的技术问题。本发明旨在提供用于制备黄粉虫抗菌肽的发酵制备方法，采用黄粉虫抗菌肽制备最佳适配发酵培养基和发酵条件，能够非常显著的提高基因工程菌的活菌数及黄粉虫抗菌肽制备效率，为今后昆虫抗菌肽部分或者完全替代抗生素应用奠定坚实的基础，从而为其作为新型的绿色抗生素提供新的思路和科学依据。

为了实现本发明的目的,本发明的技术方案如下：

本申请提供一种用于制备黄粉虫抗菌肽的发酵制备方法，所述方法中，将基因工程菌接种到发酵培养基中进行发酵培养，即得。

所述发酵培养基的总重量计，包括碳源0.1-10％；氮源0.1-10％；无机盐和微量元素0.01-5％。

优选的，所述发酵培养基中的碳源为甘油。

优选的，所述发酵培养基中的氮源为花生饼粉和玉米浆。

优选的，所述发酵培养基中的无机盐组合是氯化钙，磷酸氢二钠和磷酸二氢钾。

优选的，所述发酵培养基的组成为：甘油15g/L，花生饼粉15g/L，玉米浆15g/L，氯化钙5g/L，磷酸二氢钾5g/L，磷酸氢二钠5g/L，余量是水。

优选的，所述发酵培养温度为22℃-37℃。

优选的，所述发酵培养温度为34℃。

优选的，所述发酵培养基的pH为7.0。

所述的用于制备黄粉虫抗菌肽的发酵制备方法中，将基因工程菌按照0.5-10％的接种量接种到发酵培养基中进行发酵培养。