[发明专利]一种榛蘑抗氧化肽的制备方法

权利要求书

1.一种榛蘑抗氧化肽的制备方法，其特征在于：以榛蘑为原料依次进行蛋白的提取、沉淀、水解和分离纯化，所述蛋白的提取是先采用碱提，再将碱提后的残渣进行超声碱提，所述沉淀是依次进行等电点法和盐析法进行沉淀，最后干燥制成榛蘑蛋白粉。

2.如权利要求1所述的一种榛蘑抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述碱提是将榛蘑粉碎后加入蒸馏水中，搅拌均匀，加入浓度为0.1mol/L的NaOH调节溶液pH至10，在80℃下水浴1.5h，然后进行离心处理。

3.如权利要求1或2所述的一种榛蘑抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述榛蘑和蒸馏水的料液比为1:45，离心转速为10000rpmm，离心时间为20min。

4.如权利要求1-3任一项所述的一种榛蘑抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述超声碱提是将碱提后的残渣加入蒸馏水，料液比为1:45，混合均匀后用浓度为0.1mol/L的NaOH调节pH为9，然后室温下以200W的功率进行超声14-16min。

5.如权利要求1-4任一项所述的一种榛蘑抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述水解是将沉淀后的蛋白进行冷冻干燥后依次采用超声处理和风味蛋白酶水解制备蛋白肽。

6.如权利要求5所述的一种榛蘑抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述超声处理是将榛蘑蛋白粉配制为质量浓度为3-4%的溶液，室温下采用200W超声处理15min。

7.如权利要求5或6所述的一种榛蘑抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述风味蛋白酶水解是将超声处理后的溶液采用风味蛋白酶进行水解，水解温度为38-42℃，水解时间为2-3h。

8.如权利要求5-7任一项所述的一种榛蘑抗氧化肽的制备方法，其特征在于：所述水解pH为7，风味蛋白酶的用量为榛蘑蛋白粉质量的3.5%。

9.一种榛蘑抗氧化肽的制备方法，其特征在于，按如下步骤进行：

（一）提取蛋白

（1）将榛蘑洗净晾干、粉碎后过60目筛，按照料液比为1:45加入蒸馏水中，混合均匀后，用0.1mol/L的NaOH调节pH至10，在80℃下水浴1.5h；

（2）碱提完成后过滤出残渣，按照料液比为1:45加入蒸馏水，混合均匀后，加入0.1mol/L的NaOH调节pH至9，常温下用200W功率超声处理14-16min；

（3）将提取完成后的上清液用0.1mol/L盐酸调节pH为3.6-3.7，然后置于4℃下静置12h，然后在该温度下以10000rpm离心20min，得蛋白1，取等电点沉淀后的上清液，加入饱和硫酸铵溶液，使其饱和度为90%，置于4℃静置12h，然后在该温度下以10000rpm离心20min得蛋白2；

（4）将蛋白1和蛋白2混合后冷冻干燥得榛蘑蛋白粉 ；

（二）榛蘑抗氧化肽制备

（1）将榛蘑蛋白粉配制成质量浓度为3-4%的水溶液，常温下用功率为200W的超声处理15min，然后加入风味蛋白酶，调节pH为7，在38-42℃下水解2-3h，酶的添加量为榛蘑蛋白粉质量的4.5%；

（2）水解结束后，将水解液沸水浴灭活15min，冷却后将水解液分别用3kD、5kD和10kD的超滤膜进行超滤处理得不同分子量的多肽液，进行冷冻干燥得不同分子量的抗氧化肽。

10.如权利要求9所述的一种榛蘑抗氧化肽的制备方法，其特征在于：将所述抗氧化肽配制成浓度为30mg/L的溶液，采用葡聚糖凝胶（Sephadex G-25）进行过滤层析，然后用纯水以2-3mL/5min的速率洗脱，对洗脱峰处的样品进行收集，分为抗氧化肽1和抗氧化肽2，浓缩后冻干。