[发明专利]羟甲基香豆素在制备抗沙门氏菌毒力抑制剂中的应用

说明书

本发明涉及羟甲基香豆素在制备沙门氏菌Ⅲ型分泌系统(T3SS)抑制剂及抗沙门氏菌感染药物中的应用。通过体外细胞(人宫颈癌细胞系，HeLa)感染保护实验及鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的治疗试验证实羟甲基香豆素通过抑制T3SS的功能来发挥沙门氏菌感染。与传统抗生素相比，羟甲基香豆素可通过抑制T3SS的功能来发挥抗感染的作用，故不易诱导细菌耐药性的产生。

技术领域

本发明涉及羟甲基香豆素抑制沙门氏菌Ⅲ型分泌系统(T3SS)及在制备治疗沙门氏菌感染药物中的应用，属于医学制药技术领域。

背景技术

7-羟基-4-甲基香豆素，又称羟甲基香豆素，英文名称4-Methylumbelliferone，属香豆素衍生物。常温下为白色或类白色结晶性粉末，无臭，无味。不溶于水，略溶于甲醇、乙醇，易溶于氢氧化钠溶液。羟甲基香豆素是一种利胆药，也是抗过敏药色甘酸钠的中间体。对胆道口括约肌有舒张作用，具有较强的解痉、镇痛作用，同时也能温和、持续地促进胆汁分泌，加强胆囊收缩和抑菌作用，具有明显的利胆作用，有利于结石排出，对胆总管结石有一定排石效果。

鼠伤寒沙门氏菌是一种人畜共患食源性细菌病原体，可导致全球人类和动物食物中毒，并对公众健康和食品安全构成严重威胁。目前，抗生素被广泛用于治疗鼠伤寒沙门氏菌感染，但长期使用抗生素不可避免地导致细菌耐药性的产生。随着抗生素耐药性的增加，细菌感染的治疗几乎变得无效，迫切需要一种新的治疗策略来对抗感染。

抗毒力策略是非常有前景的解决抗生素耐药问题的手段之一。沙门氏菌T3SS是一种类似注射器的精密分子机器，可促使细菌在宿主细胞中入侵和复制，也是筛选抗毒力抑制剂的重要靶标。沙门氏菌入侵宿主细胞需要SipA、SipB、SipC等T3SS效应蛋白进入宿主细胞，通过诱导宿主细胞骨架重构促进沙门氏菌入侵细胞。其中SipA是细菌入侵宿主细胞的关键蛋白，SipB则与SipC形成蛋白质复合物来促进鼠伤寒沙门氏菌宿主细胞的侵袭。因此，沙门氏菌T3SS毒力系统是抗毒力抑制剂研发的理想靶标。

发明内容

本发明所述羟甲基香豆素CAS登录号为90-33-5，分子式为C₁₀H₈O₃，分子量为176.17。

羟甲基香豆素的化学结构式如下：

本研究以沙门氏菌T3SS效应蛋白为药物靶标筛选得到的天然化合物羟甲基香豆素在较低浓度下通过阻断T3SS关键效应蛋白SipA的转运而抑制沙门氏菌T3SS的功能，显著降低效应蛋白SipB的表达水平且不影响细菌生长。体外试验表明，经羟甲基香豆素预处理沙门氏菌后，沙门氏菌侵入HeLa细胞的能力显著降低。体内试验中，经羟甲基香豆素治疗后沙门氏菌感染小鼠存活率达30％，靶器官(肝脏、脾脏)菌落定殖数显著降低。

附图说明

图1：流式细胞术检测羟甲基香豆素抑制沙门氏菌Ⅲ型分泌系统的能力(横坐标代表蓝色荧光强度，蓝色荧光表明T3SS分泌功能正常，即表示效应蛋白SipA能够正常转运；纵坐标表示细胞数量)

图2：羟甲基香豆素治疗显著提高沙门氏菌感染小鼠保护率(横轴表示时间，纵轴表示存活率)

图3：羟甲基香豆素降低感染小鼠靶器官菌落定殖数(横轴表示不同处理组肝脏、脾脏，纵轴为菌落定殖数)

具体实施方式

通过以下实施进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。

实施例1

羟甲基香豆素作为沙门氏菌T3SS抑制剂及在制备治疗沙门氏菌感染药物中的作用，用于药学上可接受的任何载体。

实施例2