[发明专利]一种用于检测人ALDH2基因中rs671位点的试剂盒和方法

说明书

本发明涉及包含SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示引物对和SEQ ID NO.3所示探针的用于人ALDH2基因中rs671位点的试剂盒，还涉及用于检测人ALDH2基因中rs671位点的方法。本发明试剂盒及方法可以准确判断人ALDH2基因的基因类型，检测快速、准确，成本低，特异性好，灵敏度高，有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种用于检测人ALDH2基因中rs671位点的试剂盒和方法

背景技术

人线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因位于人类第十二号染色体上。ALDH2存在300多个单核苷酸多态性(SNP)位点，位于外显子上的rs671突变位点最为常见。rs671位于12号外显子上，野生型位点为G,突变型位点为A。分别构成三种基因型：野生型GG，杂合突变型GA，纯合突变型AA。当多态性位点为A时，其编码的多肽链第504位氨基酸Glu被Lys取代，引起酶失活。ALDH2在乙醇代谢中起到了极为重要的作用，它是是乙醇代谢途径中的关键酶，乙醇进入人体后由乙醇脱氢酶代谢为乙醛，再由乙醛脱氢酶代谢为水和二氧化碳。乙醛脱氢酶的缺乏可以导致乙醛的堆积，乙醛在人体内可以刺激皮肤黏膜及上呼吸道黏膜，导致眼球充血、水肿，咳嗽胸闷甚至呼吸窘迫综合征的出现。乙醛也可以通过肝脏代谢，引起肝功能受损，最终导致酒精肝，甚至肝硬化。现也有相当一部分研究证明，乙醛与癌症的发生也有一定的相关性。乙醛脱氢酶G/G野生型乙醛代谢能力强，乙醛在人体内停留时间短，G/A杂合型及A/A纯合突变型乙醛代谢能力极弱，此类人群大量饮酒后，易出现脸红、恶心、心悸等症状，且体内乙醛的浓度是野生型人群的10倍以上，乙醛在体内累积，与DNA或蛋白形成加合物，也可诱导活性氧的产生，加重对肝脏细胞的损害，这类人群不适宜饮酒。同时，临床心绞痛急性发作使用药物硝酸甘油由ALDH2代谢，而其突变体使硝酸甘油代谢速率大大降低，从而无法产生一氧化氮，难以发挥药效。因此通过检测人ALDH2基因多态性可用于检测“饮酒基因”及指导硝酸甘油合理用药。

目前ALDH2基因rs671多态性的检测方法主要有PCR-荧光探针法、测序法和基因芯片法。采用PCR-荧光探针法检测，用扩增曲线及ΔCt值进行结果判定，这种方法的不足之处在于所设计的正常探针在检测突变位点时也会出现扩增曲线，这种时候结果会模棱两可，增加复查的几率，增大了人力、试剂的损耗。DNA测序及基因芯片技术需要昂贵的仪器和专业的操作人员，并不适合于基层医院的开展。

专利CN105063178A公开了一种基于FRET探针熔解曲线法检测ALDH2基因多态性的试剂盒及方法，其需要两条探针才能检测ALDH2多态性，探针价格昂贵，检测成本高；CN109055560 A公开的ALDH2基因多态性检测方法的结果显示引物二聚体的熔解峰较明显，纯合野生型GG在88℃也会有一个干扰峰，可见其引物设计以及探针特异性差，有明显的非特异扩增，会造成结果判读失误；CN 103525904 A公开了一种利用染料法介导的熔解曲线对ALDH2进行基因分型的ALDH2基因多态性检测方法，由于EvaGreen Dye染料具有非特异性，在检测时难以与检测其他多态性位点同时进行，并且有杂峰时无法判读杂峰的具体来源。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测ALDH2基因的试剂盒和方法。

本发明提供了一种SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对。

本发明还提供了一种SEQ ID NO.3所示的探针。

本发明还提供了一种SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对和SEQ ID NO.3所示探针在制备检测ALDH2基因的试剂中的用途。

进一步地，所述试剂是检测人ALDH2基因中rs671位点的试剂。

本发明还提供了一种用于检测人ALDH2基因中rs671位点的试剂盒，它包括SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2所示的引物对和SEQ ID NO.3所示的探针。