[发明专利]喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得BmNPV病蛹的方法

说明书

本发明公开了一种通过喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法，包括：使用浓度为10⁵‑10⁹PIB/ml的BmNPV病毒液浸渍桑叶得到带病毒桑叶；选用BmNPV敏感品系的5龄末期健康蚕，喂食带病毒桑叶，保证蚕成熟前的3次喂桑中，有1次喂食的是带病毒桑叶，蚕成熟上蔟结茧化蛹，发病得到病蛹；或选用BmNPV敏感品系的5龄期起蚕，喂食带病毒桑叶，发病后取活蚕血液，接种至BmNPV敏感品系的5龄末期健康蚕，蚕成熟上蔟结茧化蛹，发病得到病蛹；或选用BmNPV敏感品系的5龄期起蚕，喂食带病毒桑叶，蚕饱食后，喂食正常桑叶，发病取活蚕血液，接种至化蛹24‑48小时的BmNPV敏感品系健康蚕蛹，发病得到病蛹。本发明操作方便和简单，杂质少，扩繁效率高，成本低。

技术领域

本发明涉及家蚕抗病育种技术领域，更具体地说，本发明涉及一种通过喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法。

背景技术

家蚕血液型脓病(BmNPV)是一种家蚕亚急性传染病，是造成蚕业生产减产的主要病害之一，在广西亚热带高温季节尤为严重。此病的发生是家蚕被家蚕核型多角体病毒(BmNPV)侵染引起的，传染方式主要为食下传染和创伤传染，所以含有病原的蚕粪、蚕尸、病蚕接触过的含有病原的环境和物品都能成为再传染源。

家蚕的生物特性和一定空间内蚕群集中的高密度的饲养方式决定了此病发生一旦发生，具有损失大，传染快的特点，也决定了家蚕血液型脓病的防治重点是在群体控制，而非个体的控制和治疗。所以家蚕抗病育种就显得尤为重要。而家蚕抗病育种一般采用的添食BmNPV进行蛾区或个体筛选，整个选育过程中需要用到大量的BmNPV。

中国专利CN108220250A公开了家蚕活体穿剌接种的方法进行病毒扩繁，存在的不足为：1、蚕体注射不易操作；2、蚕发病时会狂躁爬行，对环境病原污染有一定风险；3、在病蚕收集破碎时，大蚕的皮肤、丝腺不易破碎；4、蚕还处于食桑阶段，破碎后杂质较多，影响病原提纯；5、家蚕幼虫可合并感染多种BmNPV、CPV、FV等多种病毒病，采用幼虫扩繁的BmNPV难以制备不含其它病毒病的BmNPV多角体病毒。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

本发明的另一个目的是提供一种通过喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接毒获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法，其在5龄蚕末期或蛹期对家蚕进行喂食带毒桑叶或接种病蚕血液，使得蚕发病在上蔟之后，不会出现蚕期发病时狂躁爬行现象，蛹体较静，穿刺接种时比活泼的蚕体操作方便和简单，蛹体比蚕体更容易破碎、且破碎后的溶液比进食期的蚕破碎后杂质更少，容易提取病毒，扩繁效率高，成本低，获得的病原不含其它病毒病原。

为了实现本发明的这些目的和其它优点，本发明提供一种通过喂食接毒5龄末期蚕或穿刺接种获得不含其它病毒病原的纯BmNPV病蛹的方法，包括：

使用浓度为10⁵-10⁹PIB/ml的BmNPV病毒液浸渍桑叶得到带病毒桑叶；

A：选用BmNPV敏感品系的5龄末期健康蚕，喂食带病毒桑叶，保证蚕成熟前的2天内喂桑中，有1次喂食的是带病毒桑叶，蚕成熟后上蔟结茧化蛹后，发病得到所述BmNPV病蛹；

或B：选用BmNPV敏感品系的5龄期起蚕，喂食带病毒桑叶，蚕饱食后，喂食正常桑叶，直至活蚕出现典型病状，然后取活蚕血液，接种至BmNPV敏感品系的5龄末期健康蚕上，蚕成熟后上蔟结茧化蛹后，发病得到所述BmNPV病蛹；

或C：选用BmNPV敏感品系的5龄期起蚕，喂食带病毒桑叶，蚕饱食后，喂食正常桑叶，直至活蚕出现典型病状，然后取活蚕血液，接种至化蛹24-48小时的BmNPV敏感品系健康蚕蛹上，发病得到所述BmNPV病蛹。