[发明专利]利用磁性碳纳米管固定化酶催化制备4-氯-3-乙基-1-甲基吡唑-5-甲酸的方法

权利要求书

1.利用磁性碳纳米管固定化酶催化制备4-氯-3-乙基-1-甲基吡唑-5-甲酸的方法，包括以下步骤：

（1）在反应釜中依次将二价金属铁盐、三价金属铁盐、碳纳米管、表面活性剂、脂肪酶加入水溶液中，搅拌混匀，然后加入氢氧化钠调节pH为9.0，反应结束后再经离心分离、洗涤、干燥后得到磁性碳纳米管固定化脂肪酶，其中，二价金属铁盐选自硫酸亚铁、硝酸亚铁、氯化亚铁；三价铁盐选自硫酸铁、硝酸铁、氯化铁；碳纳米管的壁厚层数为1-30层；表面活性剂选自吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80、司盘-20、司盘-40、司盘-60、司盘-80、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、Pluronic F-108、Pluronic F-127中的至少一种；脂肪酶选自南极假丝酵母脂肪酶、皱褶假丝酵母脂肪酶、念珠菌属脂肪酶、米根霉脂肪酶、米曲霉脂肪酶、猪胰脂肪酶，并且，二价金属铁盐的浓度为10-100 g/L，三价金属铁盐的浓度10-100 g/L，碳纳米管的浓度为10-50 g/L，表面活性剂的浓度为1-10 g/L，脂肪酶的浓度为1-10 g/L，本步骤的反应时间为1-6 h，干燥方式选自自然风干、冷冻干燥、喷雾干燥中的至少一种；

（2）在反应釜中加入有机溶剂、乙醇钠，等反应体系温度降到0℃后，加入草酸二乙酯与丁酮，反应结束后得到丙酰丙酮酸乙酯，然后加入二氯乙烷与水合肼，反应结束后得到3-乙基-5-吡唑甲酸乙酯，然后加入硫酸二甲酯，反应结束后得到1-3甲基-3-乙基-5吡唑甲酸乙酯，最后通入氯气制备得到1-甲基-3-乙基-4-氯-5-吡唑甲酸乙酯，本步骤中，有机溶剂为甲苯、乙醇、乙醚、丙酮、二甲基亚砜中的至少一种，乙醇钠的浓度为100-500 g/L，草酸二乙酯的浓度为1-1000 g/L，丁酮的浓度为1-500 g/L，水合肼的浓度为1-500 g/L，硫酸二甲酯的浓度为1-1000 g/L，本步骤的反应时间为1-12 h；

（3）在反应釜中，加入1-甲基-3-乙基-4-氯-5-吡唑甲酸乙酯、二氯乙烷、磁性碳纳米管固定化脂肪酶与磷酸缓冲液，搅拌混合，反应结束后经离心分离、洗涤、干燥后制备得到4-氯-3-乙基-1-甲基吡唑-5-甲酸，其中，磷酸缓冲液的pH值为7，浓度为50-200 mmol/L，1-甲基-3-乙基-4-氯-5-吡唑甲酸乙酯的浓度为1-500 g/L，二氯乙烷的添加量为1-100 L，磁性碳纳米管固定化脂肪酶的浓度为0.1-50 g/L，磷酸缓冲液的添加量为1-100 L，本步骤的反应时间为1-12 h，干燥方式选自自然风干、冷冻干燥、喷雾干燥中的至少一种。