[发明专利]3-甲氧基酪胺的检测试剂及检测方法

说明书

本发明涉及生化检测技术领域，尤其涉及3‑甲氧基酪胺的检测试剂及检测方法。本发明提供的前处理试剂能够快速对前处理样品进行处理，首个结果检测仅需要30min，之后每测试间隔18秒出结果，大幅提高检测效率。并且该试剂对样品的前处理质量较高，从而使检测结果具有更高的灵敏度和特异性以及重复性，大大提高临床符合率。

技术领域

本发明涉及生化检测技术领域，尤其涉及3-甲氧基酪胺的检测试剂及检测方法。

背景技术

嗜铬细胞瘤和副神经节瘤(pheochromocytoma and paraganglioma，PPGL)是继发性高血压的病因之一，近年来其患病率呈上升趋势。3-甲氧酪胺(3-methoxytyramine，3-MT)能够作为PPGL的检测标志物，为PPGL的诊断和鉴别良、恶性提供一定的帮助。并且，3-MT被认为是识别嗜铬细胞瘤有无转移的重要标志。

目前3-MT的市场主流检测方法主要包括高效液相色谱法(HPLC)、高效液相电化学联用(HPLC-EDC)、酶联免疫吸附测定(ELISA)等，但HPLC检测时间长、成本高，不同实验室条件差别大较难实现批量测定，酶联免疫测定法准确性和再现性较差，且自动化程度低、易受环境影响，灵敏度较低。

磁性微球是一类球形复合材料，直径为纳米或微米级。具有大的比表面积、高分散稳定性、超顺磁性、功能基团、生物相容等特性，被广泛应用于细胞分离和提纯、免疫检测、核酸分析和免疫工程、作靶向释药的载体等领域。化学发光免疫分析是免疫反应的酶作用于发光底物，使之发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体回到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信号检测仪器即可测量出光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比，由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。磁性微球可以作为固相支持物被广泛应用于化学发光免疫分析法中。

磁微粒化学发光免疫分析法具有准确性高、灵敏度高的特点，但该方法对于检测样品要求较高，血液或尿液样品无法直接以磁微粒化学发光免疫分析法检测其中的3-MT，而前处理的酰化过程过长无疑加大了检测的时间成本。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供3-甲氧基酪胺的检测试剂及检测方法。

本发明提供的样品前处理试剂组合，其包括：酸化液、衍生化试剂和酰化缓冲液，其中：

所述酸化液为盐酸溶液或硫酸溶液；

所述衍生化试剂中包括酸酐或甲基-PEG4-NHS酯；

所述衍生化缓冲液选自Tris缓冲液、PBS缓冲液、碳酸缓冲液中任一种。

本发明所述酸化液为浓度为0.1mol/L～0.5mol/L的盐酸溶液，pH值＜1。

一些实施例中，所述盐酸溶液的浓度为0.2mol/L的盐酸溶液，pH值＜1。

或者本发明所述酸化液为浓度为0.1mol/L～0.5mol/L的硫酸溶液，pH值＜1。

一些实施例中，所述硫酸溶液的浓度为0.2mol/L的盐酸溶液，pH值＜1。

本发明尝试以柠檬酸、硝酸、硫酸和盐酸对样品进行酸化处理，结果表明柠檬酸、硝酸的酸化效果不及硫酸和盐酸。其中效果最好的是盐酸，特别是0.2mol/L的盐酸溶液。

本发明所述衍生化试剂为液态的酸酐。一些实施例中，所述酸酐为己酸酐或辛酸酐。

或者本发明所述的衍生化试剂为浓度为40mg/mL～200mg/mL的甲基-PEG4-NHS酯。

本发明对多种衍生化试剂进行尝试，结果表明酸酐的衍生化效果优于甲基-PEG4-NHS酯。酸酐中的己酸酐或辛酸酐的衍生化效果较好，其中己酸酐的效果优于辛酸酐。