[发明专利]一种瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽、制备方法及其应用

说明书

本发明提供了一种瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽、制备方法及其应用，本发明提供了一种瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽，该杂合抗菌肽能够解决瓦氏黄颡鱼鱼苗抗菌力差以及存活率低的技术问题。本发明还提供了一种瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽的制备方法，该方法采用瓦氏黄颡鱼头肾组织中的抗菌肽Hepcidin和β‑defensin为母肽进行合成，该方法步骤简单、容易操作，方便瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽的批量生产。接着，本发明提供了一种瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽在提高瓦氏黄颡鱼抗菌力和存活率中的应用，最后，本发明提供了一种提高瓦氏黄颡鱼抗菌力和存活率的制剂。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体公开了一种瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽、制备方法及其应用。

背景技术

抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)是在外界条件刺激下，动物免疫系统产生的一类对抗外源性病原体侵袭的防御性活性肽类物质，是动物非特异性免疫防御系统的重要组成部分，能够通过“溶解性”破坏或“离子”造孔来防御多种细菌、真菌、病毒及其他病原生物的感染。近年来，抗菌肽作为一种新型的高效抗菌药物，由于其具有分子量小、水溶性好、稳定性强、耐酸碱、抗菌谱广且作用机制特别，不易产生耐药性等优点，成为新型抗生素替代品开发的良好候选资源。

虽然目前已经有两千多种抗菌肽被鉴定或研究，但是大多数天然抗菌肽都表现出活性较低、不稳定、具有一定的细胞毒性和产量低等缺点。随着对抗菌肽作用机制、分子结构与功能关系等研究的逐步深入，人们在发掘新抗菌肽的同时，更注重寻找高效、广谱、稳定、低毒、肽链较短的抗菌肽，其中杂合肽即为一类这样的新型抗菌肽。

瓦氏黄颡鱼(学名：Pelteobagrus vachelli)是鲿科、黄颡鱼属一种常见的淡水鱼，由于其具有肉质鲜美、营养丰富、生长迅速和抗病力强等特点，受到广大消费者、养殖户和科研工作者的青睐，逐渐成为一种用于遗传育种、营养饲料和疾病防控研究的模式试验鱼类。然而随着养殖密度的提高，养殖水环境恶化，导致瓦氏黄颡鱼的疾病频繁爆发，特别是细菌性疾病危害最大。因此，开展瓦氏黄颡鱼抗菌肽的系统研究，对瓦氏黄颡鱼抗病机制阐述、抗病新品种培育及其抗菌肽产品开发具有重要意义。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽，该杂合抗菌肽能够解决瓦氏黄颡鱼鱼苗抗菌力差以及存活率低的技术问题。

本发明的第二目的在于提供一种瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽的制备方法，该方法采用瓦氏黄颡鱼头肾组织中的抗菌肽Hepcidin和β-defensin为母肽进行合成，该方法步骤简单、容易操作，方便瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽的批量生产。

本发明的第三目的在于提供一种瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽在提高瓦氏黄颡鱼抗菌力和存活率中的应用。

本发明的第四目的在于提供一种提高瓦氏黄颡鱼抗菌力和存活率的制剂。

首先，本发明提供了一种瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽，该杂合抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽能够有效提高瓦氏黄颡鱼对于病菌的抗病能力，从而提高瓦氏黄颡鱼鱼苗的存活率。

其次，本发明还提供了一种瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽的制备方法，包括如下步骤：去掉瓦氏黄颡鱼抗菌肽β-defencin的第1-20个氨基酸和第47-49个氨基酸、删除第36位和第42位的半胱氨酸、将第23位的异亮氨酸替换为赖氨酸以及将第28位的谷氨酸替换为精氨酸，得到dcBD1，dcBD1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；删除瓦氏黄颡鱼抗菌肽Hepcidin的α螺旋两端的多余序列并保留第8-17个氨基酸区段，得到dcHEP2，dcHEP2的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；将dcBD1与dcHEP2组合，得到dcBD1-HEP2，即得到瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽。该方法通过条件优化，获得高产、无毒、高活性的杂合抗菌肽产物，此外该方法简单方便容易操作，能够便于该瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽得到大批量生产。

接着，本发明还提供了一种瓦氏黄颡鱼杂合抗菌肽在提高瓦氏黄颡鱼抗菌力和存活率中的应用。