[发明专利]调控植物花粉管与柱头识别的硫氧还蛋白及其制备方法

说明书

本发明提供了一种调控植物花粉管与柱头识别的硫氧还蛋白及其制备方法，所述硫氧还蛋白的序列表如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示。所述硫氧还蛋白为含有序列表SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的真核重组表达质粒pETrx转化大肠杆菌DH5α获得的重组蛋白。通过用上述序列表的硫氧还蛋白能够有效提升花粉在柱头表面的水合和萌发以及花粉管在柱头表面的生长。此外，本申请还提供了一种调控植物花粉管与柱头识别的硫氧还蛋白的制备方法，该方法能够精确的制得硫氧还蛋白，方便硫氧还蛋白的使用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种调控植物花粉管与柱头识别的硫氧还蛋白及其制备方法。

背景技术

植物授粉过程包括花粉在柱头上的黏附、水合、萌发出花粉管、花粉管在花柱中极性生长、花粉管到达珠孔释放精细胞与卵细胞、中央细胞融合等，这个过程受到许多基因精细而复杂的调控。授粉过程中，花粉(管)与柱头细胞的识别决定花粉在柱头表面的水合和萌发以及花粉管在柱头表面的生长。

因此，如何通过花粉(管)与柱头细胞的识别，以提升花粉在柱头表面的水合和萌发以及花粉管在柱头表面的生长，成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种调控植物花粉管与柱头识别的硫氧还蛋白及其制备方法，以提升花粉在柱头表面的水合和萌发以及花粉管在柱头表面的生长。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

根据本发明实施例的第一方面，提供一种调控植物花粉管与柱头识别的硫氧还蛋白，所述硫氧还蛋白的序列表如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示。

进一步的，所述硫氧还蛋白为含有序列表SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的真核重组表达质粒pETrx转化大肠杆菌DH5α获得的重组蛋白。

进一步的，所述调控植物花粉管与柱头识别的硫氧还蛋白的制备方法，包括以下步骤：

①用正向引物和反向引物进行PCR扩增cDNA，PCR产物纯化后与载体pBS T连接，连接混合液转化大肠杆菌，得质粒pBSTrx；

②将质粒pBSTrx和质粒pET259用限制性内切酶EcoRV酶切，酶切片段用T4DNA连接酶连接，连接液转化入大肠杆菌，得质粒pETrx；

③将质粒pETrx转化BL21(DE3)，所得转化子BL21(DE3)/pETrx纯化所得重组蛋白，制得氨基酸序列表如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的硫氧还蛋白；

所述正向引物的序列如SEQ ID No.5或SEQ ID No.6所示；

所述反向引物的序列如SEQ ID No.7或SEQ ID No.8所示；

使用序列SEQ ID No.5和SEQ ID No.7，制得的氨基酸序列表如SEQ ID No.1所示的硫氧还蛋白；

使用序列SEQ ID No.6和SEQ ID No.8，制得的氨基酸序列表如SEQ ID No.2所示的硫氧还蛋白。

进一步的，以拟南芥cDNA为模板。

进一步的，制备SEQ ID No.1所示硫氧还蛋白的插入突变体基因为gr1-1，制备SEQID No.2所示硫氧还蛋白的插入突变体基因为nrta-1。

进一步的，gr1-1插入到GR1的第三个内含子序列中，ntra-1插入到NTRA的第1个外显子序列中。

进一步的，GR1的基因序列表如SEQ ID No.3所示；NTRA的基因序列表如SEQ IDNo.4所示；