[发明专利]一种GH16家族热稳定性增强的葡聚糖酶突变体及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种GH16家族热稳定性增强的葡聚糖酶突变体，其特征在于，以AtGlu16D为模板，对其D219位点进行定点突变，获得突变株。

2.根据权利要求1所述的一种GH16家族热稳定性增强的葡聚糖酶突变体，其特征在于，当D219位点突变成R219时，获得葡聚糖酶突变体AtGlu16D_D219R，编码葡聚糖酶突变体AtGlu16D_D219R的核苷酸序列如SEQ ID NO.1；当D219位点突变成S219获得葡聚糖酶突变体AtGlu16D_D219S，编码葡聚糖酶突变体AtGlu16D_D219S的核苷酸序列如SEQ ID NO.2。

3.根据权利要求2所述的一种GH16家族热稳定性增强的葡聚糖酶突变体，其特征在于，所述葡聚糖酶突变体AtGlu16D_D219R的氨基酸序列如SEQ ID NO.3；葡聚糖酶突变体AtGlu16D_D219S的氨基酸序列如SEQ ID NO.4。

4.一种重组载体，其特征在于，含有编码葡聚糖酶突变体AtGlu16D_D219R或 葡聚糖酶突变体AtGlu16D_D219S的质粒。

5.一种重组菌株，其特征在于，表达权利要求4所述的重组载体。

6.基于权利要求5所述的重组菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，将葡聚糖酶AtGlu16D作为模板，通过定点突变的方法构建重组质粒；

步骤2，将葡聚糖酶突变体AtGlu16D_D219R或AtGlu16D_D219S的重组质粒转入DMT感受态，得重组载体；

步骤3，将突变重组载体进行线性化处理，通过电击法转入GS115毕赤酵母感受态，诱导表达后筛选有催化活力的突变菌株；

步骤4，培养重组菌株，大量表达葡聚糖酶突变体；

步骤5，回收并且纯化所表达的有催化活力的重组菌株。

7.基于权利要求1所述的葡聚糖酶突变体、权利要求2所述的葡聚糖酶突变体AtGlu16D_D219R或葡聚糖酶突变体AtGlu16D_D219S，权利要求3所述的重组载体，或权利要求4所述的重组载体在降解β-葡聚糖上的应用。