[发明专利]一种肿瘤干细胞向神经元方向分化方法

权利要求书

1.一种肿瘤干细胞向神经元方向分化方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

S1、肿瘤干细胞获取；

S2、肿瘤干细胞向神经元诱导分化；

S21、将肿瘤干细胞接种在分化培养基中培养3-7天，中间每2天换液1次，其中分化培养基为包含FBS、MEM-100 × 、青链霉素100 × 、全反式维甲酸ATRA和姜黄素的DMEM/F12完全培养基；

S22、将分化后的细胞导入神经元维持培养基中继续培养7-14天，神经元维持培养基为包含BDNF、NGF、MEM-100 × 、青链霉素100 × 和B27-50 × 的Neurobasal Medium A完全培养基；

所述肿瘤干细胞采用胶质瘤细胞系U-118MG；

ATRA的用量为1µM，姜黄素的用量为0.5µM；

步骤S1具体包括如下步骤：

1）胶质瘤细胞系U-118MG干性培养；

将U-118MG细胞接种在肿瘤干细胞培养基中，培养3-5天，肿瘤干细胞培养基为包含1-40ng/ml的bFGF、1-20ng/ml的EGF、0.5-4%的B27-50 × 、0.1-0.4%青链霉素100 × 的无血清DMEM/F12完全培养基；

2）免疫磁珠分选；

3）分选后差速贴壁纯化；

4）肿瘤干快速扩增。

2.根据权利要求1所述的肿瘤干细胞向神经元方向分化方法，其特征在于：分化培养基中FBS的体积分数为1%-8%，MEM-100 × 的体积分数为0.5%-2%，青链霉素100 × 的体积分数为0.1-0.4%。

3.根据权利要求2所述的肿瘤干细胞向神经元方向分化方法，其特征在于：每100mL分化培养基中FBS的用量为5mL，MEM-100 × 的用量为1mL，青链霉素100 × 的用量为200µL。

4.根据权利要求1所述的肿瘤干细胞向神经元方向分化方法，其特征在于：神经元维持培养基中BDNF的浓度为10ng/mL-80ng/mL，NGF的浓度为5ng/mL-40ng/mL，MEM-100 × 的体积分数为0.5%-2%，青链霉素100 × 的体积分数为0.1-0.4%，B27-50 × 的体积分数为0.5%-4%。

5.根据权利要求4所述的肿瘤干细胞向神经元方向分化方法，其特征在于：每100mL神经元维持培养基中BDNF的浓度为50ng/mL，NGF的浓度为10ng/mL，MEM-100 × 的用量为1mL，青链霉素100 × 的用量为200µL，B27-50 × 的用量为2mL。

6.根据权利要求1所述的肿瘤干细胞向神经元方向分化方法，其特征在于：在进行S2步骤之前先将得到的肿瘤干细胞使用胰酶消化得到单细胞。

7.根据权利要求1所述的肿瘤干细胞向神经元方向分化方法，其特征在于：步骤S21的培养条件为：37℃、5% CO₂培养箱中培养。