[发明专利]编辑RNA的融合蛋白及其应用

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白自N端至C端依次包括：单链RNA结合蛋白片段、RNA发夹结合蛋白片段、出核信号肽片段和脱氨酶片段；所述脱氨酶片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:99所示。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的N端和/或C端还连接有富含组氨酸结构域片段，所述富含组氨酸结构域片段的拷贝数为大于等于1的自然数，优选为1、2、3或4；

较佳地，所述富含组氨酸结构域片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

3.如权利要求1或2所述的融合蛋白，其特征在于，所述单链RNA结合蛋白片段、RNA发夹结合蛋白片段、出核信号肽片段和脱氨酶片段之间通过连接子连接；和/或，所述脱氨酶片段和所述富含组氨酸结构域片段之间通过连接子连接；和/或，一个以上拷贝的所述富含组氨酸结构域片段之间通过连接子连接；

较佳地，所述连接子为(G_mS)_n或如SEQ ID NO:97、98或100所示的氨基酸序列；其中，m和n分别为0或正整数，且不同时为0，例如(G₂S)₆、(GS)₃；

更佳地，所述单链RNA结合蛋白片段与所述RNA发夹结合蛋白片段之间通过(G₂S)₆连接；和/或，所述RNA发夹结合蛋白片段与所述出核信号肽片段之间通过如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列连接；和/或，所述出核信号肽片段与所述脱氨酶片段之间通过串联的连接子连接，所述串联的连接子优选由EF和如SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列串联；和/或，所述脱氨酶片段和所述富含组氨酸结构域片段之间通过(GS)₃连接；和/或，一个以上拷贝的所述富含组氨酸结构域片段之间通过如SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列连接。

4.如权利要求1～3任一项所述的融合蛋白，其特征在于，所述单链RNA结合蛋白片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:38所示；

和/或，所述RNA发夹结合蛋白片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:96所示；

和/或，所述出核信号肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

5.一种碱基编辑系统，其特征在于，所述碱基编辑系统包括引导RNA和如权利要求1～4任一项所述的融合蛋白；

较佳地，所述引导RNA包括骨架结构和识别结构；所述骨架结构包含至少一个发夹结构，优选包含2个发夹结构；

更佳地，所述发夹结构的转录模板具有如SEQ ID NO:101所示的核苷酸序列；和/或，所述识别结构的长度为30nt。

6.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1～4任一项所述的融合蛋白或如权利要求5所述的碱基编辑系统。

7.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒包括启动子和如权利要求6所述的多核苷酸；

较佳地，所述启动子为U6启动子，优选为人源U6启动子；

更佳地，所述表达盒的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

8.一种构建体，其特征在于，所述构建体包含如权利要求6所述的多核苷酸或如权利要求7所述的表达盒；

较佳地，所述构建体选自细菌构建体、真菌构建体、动物细胞构建体和植物细胞构建体。

9.一种表达系统，其特征在于，所述表达系统为表达如权利要求8所述的构建体的宿主细胞；

较佳地，所述宿主细胞为真核细胞或原核细胞；

更佳地，所述真核细胞为人细胞系或鼠源细胞，优选地为人肾上皮细胞系或鼠脑神经瘤细胞，例如HEK293T或N2A。

10.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如权利要求1～4任一项所述的融合蛋白或如权利要求5所述的碱基编辑系统，以及药学上可接受的载体。