[发明专利]一种唾液腺腺样囊性癌类器官及其培养方法、培养基和应用

权利要求书

1.一种培养唾液腺腺样囊性癌类器官的培养基，其特征在于，所述培养基包括：Advanced DMEM/F12，以及以Advanced DMEM/F12为基准的以下成分：0.5～2v％青霉素-链霉素双抗、0.5～2v％GlutaMAX、0.5～2v％HEPES缓冲液，50～300ng/ml成纤维生长因子、10～200ng/ml EGF、0.01～1μmol/l TGF-βI型受体抑制剂、300～800ng/ml Wnt3a重组蛋白、0.05～0.3μg/ml Noggin重组蛋白、0.05～0.3μg/ml R-spondin-1重组蛋白、0.2～2.5mmol/L N-乙酰半胱氨酸，5～30mmol/L烟酰胺(Nicotinamide)，0.5～5v％B27补充剂，0.2～5μmol/L地塞米松，5～30μmol/l Y-27632。

2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，还包括N-2补充剂。

3.如权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述N-2补充剂的含量占Advanced DMEM/F12的体积百分数为0.5～3％。

4.如权利要求1～3任一项所述的培养基在培养唾液腺腺样囊性癌类器官中的应用。

5.一种唾液腺腺样囊性癌类器官的培养方法，其特征在于，所述方法包括，将破碎后的唾液腺腺样囊性癌肿瘤细胞采用如权利要求1～3任一项所述的培养基进行培养，获得所述的唾液腺腺样囊性癌类器官。

6.如权利要求5所述的培养方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)组织破碎

将唾液腺腺样囊性癌肿瘤组织进行破碎，获得组织碎块；

(b)组织消化

采用消化酶消化所述的组织碎块，获得悬液；

所述消化酶包含Ⅱ型胶原酶和DNase I；优选地，所述消化酶包含0.8～4mg/mlⅡ型胶原酶和0.05～0.3mg/ml DNase I；

(c)过滤

对消化后的悬液进行过滤，弃上清，重悬沉淀获得细胞悬液，接种并培养。

7.如权利要求6所述的培养方法，其特征在于，包括以下1)～6)之至少一项：

1)步骤(b)中，所述消化在摇床中进行，摇床转速为150～500rpm；

2)步骤(c)中，所述过滤的步骤包括：将所述消化后的悬液依次通过90～120μm、60～80μm的过滤膜进行过滤；优选地，依次通过100μm、70μm的过滤膜进行过滤；

3)步骤(c)中，获得所述细胞悬液后，将所述细胞悬液与基质胶混合，接种到如权利要求1～3任一项所述的培养基进行培养；优选地，所述混合的操作在0～10℃进行；

4)步骤(c)中，所述培养的温度为28～40℃；

5)步骤(c)中，所述培养的时间为5～10d；

6)步骤(c)中，先将接种后的培养板倒置培养至基质胶形成圆顶状结构后，再正置在培养箱中进行培养。

8.如权利要求5所述的培养方法，其特征在于，培养获得的所述唾液腺腺样囊性癌类器官为原代唾液腺腺样囊性癌类器官，将所述原代唾液腺腺样囊性癌类器官传代，获得传代唾液腺腺样囊性癌类器官；

所述传代的步骤包括：将基质胶融化，离心弃上清，去除基质胶，加胰酶消化，进行传代培养，培养步骤和方法同所述原代唾液腺腺样囊性癌类器官。

9.采用如权利要求5～8任一项所述的方法制备得到的唾液腺腺样囊性癌类器官。

10.如权利要求9所述的唾液腺腺样囊性癌类器官的如下至少一项应用：

1)制备或筛选治疗唾液腺腺样囊性癌的药物；

2)研究唾液腺腺样囊性癌的发生发展机制；

3)筛选唾液腺腺样囊性癌的相关生物标志物。