[发明专利]一种乳四肽的合成方法

说明书

本申请属于生物技术领域，尤其涉及一种乳四肽的合成方法。本申请的合成方法，包括：构建含有融合蛋白的表达载体质粒；融合蛋白具有如SEQ IDNO:1所示的氨基酸序列；融合蛋白含有用于纯化蛋白的亲和层析标签；将表达载体质粒转化至宿主菌中，并使宿主菌诱导表达融合蛋白；将表达融合蛋白的宿主菌依次进行菌体破碎和除杂处理，得到含有融合蛋白的菌液；将菌液于亲和层析柱中进行亲和纯化，然后在亲和层析柱中通入激活内含肽切割的缓冲液以激活融合蛋白的内含肽进行自切割，得到乳四肽。本申请提供了一种乳四肽的合成方法，有效解决目前乳糖四肽合成困难、产量低和纯化成本高等问题。

技术领域

本申请属于生物技术领域，尤其涉及一种乳四肽的合成方法。

背景技术

近年来，小分子肽成为合成领域中的明星靶标，在食品、药品、保健品和护肤品等领域展现重要的功能和应用价值。来自乳清消化中的β-乳球蛋白的甘氨酸-苏氨酸-色氨酸-酪氨酸(GTWY)四肽小分子(又被称为乳四肽，lacto-tetrapeptide)被报道能够增强神经活性、改善海马依赖性记忆功能，提高宿主的记忆能力，在预防和治疗老年痴呆、阿尔兹海默症等退行性神经疾病上发挥重要的作用。因此乳四肽在医疗领域和食品保健品领域具有重要的潜在价值。但是，目前还没有较为成熟的乳四肽合成技术，这阻碍了乳四肽的应用和发展。

发明内容

鉴于此，本申请提供了一种乳四肽的合成方法，有效解决目前乳糖四肽合成困难、产量低和纯化成本高等问题。

本申请提供了一种乳四肽的合成方法，包括：

步骤1、构建含有融合蛋白的表达载体质粒，其中，所述融合蛋白由相互串联的内含肽Ssp DnaB和乳四肽组成；所述融合蛋白具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述融合蛋白的末端连接有用于纯化蛋白的亲和层析标签；

步骤2、将所述表达载体质粒转化至宿主菌中，并使所述宿主菌诱导表达所述融合蛋白；

步骤3、将表达所述融合蛋白的宿主菌依次进行菌体破碎和除杂处理，得到含有所述融合蛋白的菌液；

步骤4、将所述菌液于亲和层析柱中进行亲和纯化，然后在所述亲和层析柱中通入激活内含肽切割的缓冲液以激活所述融合蛋白的内含肽进行自切割，得到乳四肽。

具体的，为了保证纯化寡肽的完整性和正确性，所述融合蛋白不能有连接肽等额外的氨基酸残基。

具体的，SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中，所述内含肽Ssp DnaB的氨基酸序列为：

MGSSHHHHHHHHAISGDSLISLASTGKRVSIKDLLDEKDFEIWAINEQTMKLESAKVSRVFCTGKKLVYILKTRLGRTIKATANHRFLTIDGWKRLDELSLKEHIALPRKLESSSLQLSPEIEKLSQSDIYWDSIVSITETGVEEVFDLTVPGPHNFVANDIIVHN。

具体的，SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中，所述乳四肽的氨基酸序列为：GTWY。

另一实施例中，步骤1具体包括：将所述融合蛋白构建到原核表达载体中，得到含有融合蛋白的表达载体质粒。

另一实施例中，所述原核表达载体可以为市售任意原核表达载体，包括但不限于pET系列载体、pGEX系列载体、pSUMO系列载体和pBAD系列载体中的一种或多种。

另一实施例中，所述融合蛋白的数量为1个或复数个，所述融合蛋白的数量为2个以上时，两个相邻所述融合蛋白以所述原核表达载体的核糖体结合位点RBS相隔。

另一实施例中，所述融合蛋白的数量为2个、3个或4个。

另一实施例中，所述融合蛋白具有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。