[发明专利]一种基于过滤法的寡肽合成及纯化方法

权利要求书

1.一种寡肽合成及纯化方法，其特征在于，包括：

步骤1、构建含有融合蛋白的表达载体质粒，其中，所述融合蛋白由相互串联的内含肽和目标寡肽组成；所述内含肽为产生C末端自切割的蛋白分子；

步骤2、将所述表达载体质粒转化至宿主菌中，并使所述宿主菌表达所述融合蛋白；

步骤3、将表达融合蛋白的宿主菌依次进行破碎和第一次过滤处理，收集含有分子量大于等于10KDa总蛋白的第一混合物；

步骤4、调节所述第一混合物的pH值小于等于7然后进行孵育以激活所述内含肽进行自切割，得到含有内含肽和目标寡肽的第二混合物；

步骤5、将所述第二混合物进行第二次过滤处理，收集含有分子量小于3KDa的目标寡肽。

2.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，所述目标寡肽的氨基酸数目为2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个或25个。

3.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，所述融合蛋白的数量为复数个，两个相邻所述融合蛋白间以所述表达载体的核糖体结合位点RBS相隔。

4.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，所述内含肽选自SspDnaB、Ssp DnaE、Mtu RecA、Mth RIR1、Sce VMA、MtuΔI-CM和GP41-1中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，步骤3中，所述破碎的方式为加热破碎法、裂解液超声破碎法或高压破碎法中的一种。

6.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，步骤3中，所述第一次过滤为：将破碎后宿主菌经过10KDa的滤膜。

7.根据权利要求6所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，所述滤膜选自10KDa的超滤管或/和10KDa的超滤膜包。

8.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，步骤4中，采用酸性缓冲液调节所述第一混合物的pH值，所述酸性缓冲液选自pH 5～7的磷酸缓冲液、pH 5～7的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和pH 5～7哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液的一种或多种。

9.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，步骤4中，所述孵育的条件为37℃孵育2h或4℃孵育6～24h。

10.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，步骤5中，所述第二次过滤处理为：将所述第二混合物经过3KDa的滤膜。