[发明专利]一种虫草属菌株的培养方法

说明书

本专利公开了一种虫草属菌株的培养方法，具体地，该方法至少包括在虫草属菌株特别是蛹虫草菌株培养中使用褪黑素。经实验证明褪黑素能有效逆转菌种退化不影响其产量和其它经济性状。经此方法培养已经退化的蛹虫草菌株，菌株角变频率明显下降，气生菌丝明显减少，菌丝中活性氧、丙二醛明显减少，活性物质虫草素、腺苷含量明显增多。且此方法操作简单、经济实惠，安全无害，效果显著。

技术领域

本发明属于真菌菌种种性保持领域，具体涉及一种提高蛹虫草菌种活性、延缓菌种退化的方法，更具体涉及一种有效延缓菌种退化、提高菌种活性的蛹虫草液体深层发酵培养方法。

背景技术

蛹虫草作为一种重要的药用食用菌，其菌种退化问题一直是研究者关注的热点。蛹虫草受到医药界、精细化工业高度关注，其主要活性成分如虫草素、腺苷、多糖、虫草酸、麦角甾醇等功效逐渐被认知并广泛应用，具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、降血脂等功效。在蛹虫草菌种研究中发现，菌种的退化导致活性氧、丙二醛有害物质累积，其代谢产物合成能力下降等。因而，退化严重影响了蛹虫草的经济性状，给大规模生产及菌种保藏工作带来重大损失。

导致蛹虫草退化的原因有很多，可以是自身基因突变，也可能是不良环境因素导致的变异，或者微生物污染导致，或者保藏方式不当，或连续转代等都会使得退化现象不断扩大。

蛹虫草菌种主要采取复壮的方式，使退化菌株恢复优良的性状。例如：组织分离:将退化的蛹虫草栽培出菇，挑选外观健壮的子实体，在无菌条件下重新进行组织分离。菌丝纯化与尖端菌丝分离:挑取健壮的菌丝尖端部分，进行培养，以期获得复壮的菌株。有性孢子分离筛选:选择长势好的子实体，采用孢子收集器将有性孢子收集后进行多孢或单孢分离培养。将所得单核菌丝还要与可亲和的单核菌丝杂交后形成双核菌丝，再进行出菇实验，确定丰产的菌株。添加抗生素，对菌株进行复壮。

以上方法都是在菌株退化后，再利用不同方法，重新选择。前三种方法都费时耗力，而且不能保证得到复壮的菌株，最后一种方法，虽然简单，但要添加各种不同抗生素，目前抗生素使用已受到严格控制，因此很难得到很好推广和应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种有效防止蛹虫草菌种退化的方法，该方法突破了传统的菌株复壮的方法，采用简单、经济、无害的褪黑素，且效果显著。

本发明的一种有效延缓蛹虫草菌种退化的方法，具体地，该方法至少包括在蛹虫草菌株培养中使用褪黑素。在本发明提供的实施方式中，使用含有褪黑素的培养基培养蛹虫草菌株。

具体地，褪黑素在培养基中的浓度为10～200mol/L，优选地，褪黑素在培养基中的浓度为20～150mol/L，更加优选为50～100mol/L，特别优选为60mol/L。

可选的培养基包括PDA或PDB加富培养基培养蛹虫草菌。

所述PDA加富培养基的组成为：基于每1000ml的培养基，含有：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蛋白胨3g、硫酸镁1.5g、磷酸二氢钾3g、维生素B1 0.01g、蒸馏水补足至1000ml。

所述PDB加富培养基的组成为：基于每1000ml的培养基，含有：马铃薯200g、葡萄糖20g、蛋白胨3g、硫酸镁1.5g、磷酸二氢钾3g、维生素B1 0.01g、蒸馏水补足至1000ml。

更具体地，本发明给出了褪黑素培养蛹虫草的方法，包括以下步骤：

将初期退化蛹虫草菌株，接种于培养基中。对于蛹虫草的接种量没有特别的要求。通常基于基于100重量份的培养基，接种0.1～5重量份的初期退化蛹虫草菌株。在优选的实施方式中，初期退化蛹虫草菌株的接种量为0.3～1％。在实际操作中，也可基于10ml的培养基，接种约为0.05～0.1cm²的蛹虫草菌。