[发明专利]一种胃癌血浆外泌体circRNA标志物及其试剂盒和应用

说明书

本发明涉及一种胃癌血浆外泌体circRNA标志物及其试剂盒和应用，属于生物及分子诊断技术领域。本发明提供了血浆外泌体circRNA标志物在制备胃癌诊断试剂盒和/或胃癌诊断制剂中的应用，首次发现血浆外泌体中存在hsa_circ_0000512，并通过实验证实：本发明所述的血浆外泌体hsa_circ_0000512的表达水平在胃癌患者体内显著升高，是胃癌的早期诊断和预后判断具有潜在价值的新型生物标志物。

技术领域

本发明涉及生物及分子诊断技术领域，特别是涉及一种胃癌血浆外泌体circRNA标志物及其试剂盒和应用。

背景技术

胃癌(Gastric cancer,GC)，又称胃腺癌(Gastric adenocaroma)，近年来引起了世界各国的社会关注，是世界上最常见的恶性肿瘤之一，根据最新的全球数据统计，胃癌新增病例超过100万例，死亡人数估计为769000人。尽管近年来在诊断方法和外科手术方面取得了许多进展，但胃癌患者的总体生存状况仍不尽如人意，大多数国家的5年总生存率低于30％。胃癌治疗的复杂性在于其肿瘤组织内的异质性，不仅有遗传因素，而且存在表观遗传的改变，尽早发现及时治疗能为患者带来最大的生存空间。因此，寻找有效的诊断和治疗方法对胃癌的研究具有重要意义。

环状RNA(CircRNA)是一种新的非编码RNA，在肿瘤的起始和发展中起着重要作用。circRNA的多种生物学功能正在被广泛研究。其中，最显著的功能是作为miRNA海绵，可以结合单个或多个miRNA并调控其下游基因的表达，从而发挥对疾病的调控作用。此外，circRNA具有组织和发育阶段特异性表达的特点，其表达广泛，稳定性高，具有环状结构的可耐受RNaseR的降解，比线性转录本更稳定。因此，这些分子有望从临床样本中提取并分析，其作为生物标志物的潜力的研究已被广泛开展。

外泌体直径30-100nm，是由多种细胞分泌的小细胞外囊泡(sEV)，几乎存在于所有体液中。外泌体的生物发生始于质膜上的内吞作用形成内体，然后早期的内体成熟为多囊泡内体(MVE)，外泌体通过内体向内出芽产生腔内囊泡(ILV)然后与细胞膜融合释放ILV到细胞外从而形成。分析表明，外泌体内富含多种核酸分子，且外泌体的双层膜能保护这些分子免受蛋白酶、核酸酶和其他环境影响，越来越多的证据表明，外泌体内富含circRNA并能在体液中检测到，可参与癌症的病理生理过程导致癌细胞增殖、侵袭、转移和化疗耐药性。因此，外泌体circRNA的液体活检可能被开发为新型的非侵入性生物标志物和癌症的潜在靶分子。

目前，在胃癌的研究领域中，由于外泌体提取方法的限制，血浆外泌体circRNA标志物的研究鲜有报道，大部分研究只是聚焦于组织或血液circRNA的纯研究。且由于经典的外泌体提取方法—超速离心法耗时长、损失大，样本量需求高，难以满足临床的检测需求，因此亟待开发一种更为简单快速的血浆外泌体circRNA提取方法，为胃癌的早期诊断提供新的潜在标志物以及帮助临床实验室挖掘更多的血浆外泌体circRNA标志物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胃癌血浆外泌体circRNA标志物hsa_circ_0000512，通过对血浆外泌体中hsa_circ_0000512含量的检测和分析，能够对胃癌进行早期诊断和预后判断。

为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种血浆外泌体circRNA标志物在制备胃癌诊断试剂盒和/或胃癌诊断制剂中的应用，所述血浆外泌体circRNA标志物为hsa_circ_0000512。

优选的，所述hsa_circ_0000512的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

优选的，所述血浆外泌体circRNA标志物由血浆外泌体circRNA提取试剂盒提取得到，所述血浆外泌体circRNA提取试剂盒包括提取血浆外泌体试剂和提取外泌体circRNA试剂。