[发明专利]一株变形假单胞菌flgK基因沉默菌株及其构建方法

说明书

本发明提供了一株变形假单胞菌flgK基因沉默菌株及其构建方法。所述菌株分类命名为Pseudomonas plecoglossicida flgK‑RNAi，已于2022年1月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022077。人工感染实验结果表明，本发明所构建的变形假单胞菌flgK基因沉默菌株对斜带石斑鱼的致病力显著下降，可用于研究变形假单胞菌的致病机理。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株变形假单胞菌 flgK基因沉默菌株及其构建方法。

背景技术

变形假单胞菌( Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼、香鱼等经济鱼类“内脏白点病”的病原，具有较高的感染率和死亡率，造成巨大的经济损失。

flgK基因是细菌众多鞭毛基因中的一个，位于细菌鞭毛钩和鞭毛丝之间，是两个钩丝连接蛋白之一。 flgK基因是鞭毛组装所必需的，影响与细菌致病性相关的许多因素，如鞭毛形成、运动、粘附和生物膜发育。由 flgK基因翻译转录得到的FlgK蛋白由两个或三个结构域组成，比较已知的FlgK蛋白结构发现，FlgK蛋白的细胞近端部分相对保守。在对许多细菌的研究过程中发现FlgK蛋白作为疫苗具有很大的研究潜力。

本发明通过基因沉默技术构建了一株变形假单胞菌 flgK基因稳定沉默菌株，采用人工感染实验确定 flgK基因稳定沉默菌株对斜带石斑鱼的致病性，结果表明，本发明所构建的变形假单胞菌 flgK基因稳定沉默菌株对斜带石斑鱼的致病力显著下降，可用于研究变形假单胞菌的致病机理。

发明内容

本发明的目的在于提供一株变形假单胞菌 flgK基因稳定沉默菌株及其构建方法，以揭示 flgK基因对变形假单胞菌运动性、趋化等力因子以及在转录组、代谢组方面的影响，明确该变形假单胞菌 flgK基因稳定沉默菌株的应用范围。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一株变形假单胞菌 flgK基因沉默菌株，所述菌株分类命名为 Pseudomonas plecoglossicida flgK-RNAi，已于2022年1月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022077，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学。

进一步的，上述一株变形假单胞菌 flgK基因沉默菌株的构建方法包括如下步骤：

步骤一：通过比较分析变形假单胞菌感染斜带石斑鱼互作转录组数据，筛选到感染过程中表达量提高的 flgK基因；