[发明专利]固定化脂肪酶及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种固定化脂肪酶，其特征在于，脂肪酶为疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶，固定化载体为D3520大孔树脂；

所述固定化脂肪酶用于催化甘油解反应制备甘油二酯，催化得到的产物中，甘油一酯的含量≤6.5wt%。

2.一种固定化脂肪酶的制备方法，用于制备如权利要求1所述的固定化脂肪酶，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将D3520大孔树脂依次用乙醇、酸、碱和缓冲液浸泡，得到活化后大孔树脂；

（2）将活化后大孔树脂、脂肪酶加入预设pH的磷酸缓冲液中，得到固定体系；将所述固定体系混合预设时间，固液分离、干燥后得到固定化脂肪酶。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述固定体系中，所述活化后大孔树脂的含量为20~50g/L，所述脂肪酶的浓度为500~800μg/mL。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，将所述固定体系在20~30℃固定2~5h，固定过程中进行水浴震荡。

5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）包括：

（1.1）将大孔树脂浸泡于90~95%的乙醇中20~40h，过滤并采用水冲洗；

（1.2）将步骤（1.1）得到的大孔树脂浸泡于2~10%的盐酸溶液中2~5h，过滤并采用水冲洗至滤液pH为6.8~7.2；

（1.3）将步骤（1.2）得到的大孔树脂浸泡于2~10%的氢氧化钠溶液中2~5h，过滤并采用水冲洗至滤液pH为6.8~7.2；

（1.4）将步骤（1.3）得到的大孔树脂浸泡于pH为6.8~7.2的磷酸缓冲液中1~3h，过滤并采用磷酸缓冲液冲洗至滤液pH为6.8~7.2，即得到活化后大孔树脂。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇浓度为95%，所述盐酸溶液浓度为5%，所述氢氧化钠溶液浓度为5%。

7.如权利要求1所述的固定化脂肪酶在催化甘油解反应制备甘油二酯中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，将甘油、油脂、权利要求1所述的固定化脂肪酶混合，在50~60℃反应3~16h，固液分离即得甘油二酯成品。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，甘油、油脂的摩尔比为1:（4~4.5），固定化脂肪酶的用量为甘油、油脂总重量的3.5~4.5wt%；

所述油脂选用大豆油、棕榈油、菜籽油、玉米油、花生油、山茶油中的一种或多种。

10.一种用于食品的甘油二酯，其特征在于，其由如权利要求1所述的固定化脂肪酶催化甘油解反应制备而得。