[发明专利]增强型Au@PtNPs探针制备方法及具有增强型Au@PtNPs探针的纳米酶试纸条

说明书

本发明涉及一种增强型Au@PtNPs探针制备方法及具有增强型Au@PtNPs探针的纳米酶试纸条，增强型Au@PtNPs探针制备方法如下步骤：(1)制备Au@PtNPs溶液，(2)制备生物素化抗体，(3)制备增强型Au@PtNPs探针。利用创新的制备方法，将亲和素结合到Au@PtNPs探针中，使得其灵敏度和稳定性显著提升，再利用其制备成具有增强型Au@PtNPs探针的纳米酶试纸条，可以加强检测效果，可以对例如新冠疫情的严格排查起到关键作用。

【技术领域】

本发明涉及医疗器械领域，尤其涉及一种增强型Au@PtNPs探针制备方法及具有增强型Au@PtNPs探针的纳米酶试纸条。

【背景技术】

Au@PtNPs探针有多种现有制备方法，纳米酶检测试纸条也采用Au@PtNPs探针做为其构件，但是在应对例如疫情的检测、尤其是早期排查其灵敏度和稳定性依然有待提升。

【发明内容】

本发明的目的在于提供一种增强型Au@PtNPs探针制备方法及具有增强型Au@PtNPs探针的纳米酶试纸条，旨在解决灵敏度和稳定性不足的问题。

本发明是这样实现的：增强型Au@PtNPs探针制备方法，包括如下步骤：

(1)制备Au@PtNPs溶液，将水加到锥形瓶中并记录水体积，加入1％水体积的氯金酸，摇晃混匀，放在电热炉上加热至溶液沸腾，快速加入柠檬酸三钠，保持摇晃使溶液处于轻微沸腾状态，持续加热10-20min，确保还原反应充分进行，然后补加水到原水体积，继续加热胶体金溶液，保持轻微沸腾状态，先加入抗坏血酸，再加入氯铂酸，持续10-20min，确保还原反应充分进行，然后补加水到原水体积，冷却至室温后获得 Au@PtNPs溶液备用；

(2)制备生物素化抗体，将抗体用碳酸氢钠缓冲液稀释到1mg/ml 的抗体溶液，用DMSO溶解NHS修饰的生物素获得生物素溶液，取生物素溶液加入抗体溶液中，在室温下持续搅拌约2～4小时，再加入NH4Cl，在室温下搅拌10分钟，然后在4℃，用PBS充分透析，以除去游离的生物素，获得生物素化抗体；

(3)制备增强型Au@PtNPs探针，上述Au@PtNPs溶液用水稀释后加入碳酸钾调节pH值，然后加入亲和素，混匀后室温静置10分钟以上，加入 PEG 20000至终浓度1mg/mL，再加入BSA至终浓度10mg/mL，封闭Au@PtNPs 上多余的结合位点，室温静置10分钟以上作为待用液，取9000g待用液离心10min，弃掉上清液，再加入1mL的1％BSA进行重悬，重复离心和重悬两次，最后一次使用100μL的1％BSA重悬，最后再加入生物素化抗体，利用亲和素和生物素的结合反应制备获得增强型Au@PtNPs探针，4℃避光保存。

本发明的进一步技术方案是：所述抗坏血酸用量为0.25M抗坏血酸4 mL，，所述氯铂酸用量为1M氯铂酸300μL。

本发明的进一步技术方案是：所述碳酸氢钠缓冲液pH为8.0。

本发明的进一步技术方案是：所述生物素为NHSB。

本发明的进一步技术方案是：所述NH4Cl浓度为1M。

本发明还提供了一种具有增强型Au@PtNPs探针的纳米酶试纸条，包括增强型Au@PtNPs探针。

本发明的进一步技术方案是：所述纳米酶试纸条的制备方法为：首先将样品垫使用缓冲液进行预处理；然后将增强型Au@PtNPs探针加到探针垫上；再然后在NC膜上布置包被捕获抗体检测线和包被抗鼠二抗控制线，两线之间的距离为5mm，再然后将上述组件有序地组装在PVC板上，两个相邻部分之间有大约2mm的重叠，最后将产品切成3mm宽，获得利用增强型Au@PtNPs探针制备的纳米酶试纸条，将其密封后避光保存。