[发明专利]一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法

说明书

本发明公开了一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法，包括步骤：（1）将葡萄籽提取物待测样品加入有机溶剂提取，得供试品溶液；（2）取供试品溶液，采用液质联用仪进行检测，采用外标法定量计算样品中原花青素C1含量；其中色谱条件为：采用五氟苯基色谱柱、苯基色谱柱或C30色谱柱，以甲酸为流动相A，甲醇为流动相B进行梯度洗脱。本发明方法运用液质联用仪分析技术进行分析，并通过色谱条件的优化，可以排除葡萄籽提取物中原花青素C1以外的其它多酚类物质的基质干扰，特别是和原花青素C1互为旋光异构体的原花青素C2的干扰，从而能够准确测定葡萄籽提取物中原花青素C1的含量，有利于实现对葡萄籽提取物质量的有效控制。

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法。

背景技术

原花青素是植物中广泛存在的一大类多酚类化合物的总称，具有抗氧化、消除自由基的作用。2021年中科院院营养与健康研究所发布了关于葡萄籽提取物中的原花青素C1具有定向清除衰老细胞的作用，因此开发测定葡萄籽提取物中原花青素C1的检测方法具有一定的研究意义。

《UPLC测定桂皮中原花青素B-2和原花青素C-1含量》和《HPLC法同时测定金荞麦片中6个多酚类成分》涉及原花青素C1的含量检测。这两篇文献均用液相仪器在280nm/220nm波长下测定原花青素C1含量，而葡萄籽提取物具有多种结构相似的多酚成分，多酚类物质在280nm/220nm均有紫外强吸收，导致现有的检测方法不能很好的适用于葡萄籽提取物中原花青素测定。本申请使用文献《UPLC测定桂皮中原花青素B-2和原花青素C-1含量》的方法：C18色谱柱(2.0 mm × 100 mm，2μm)，流动相乙腈-0.2%乙酸水梯度洗脱，检测器波长280 nm，测定定葡萄籽提取物中原花青素C1，结果如图1-1所示。结果表明使用该方法检测葡萄籽提取物会有很多杂峰干扰，不能有效分离原花青素C1和其它多酚类物质，原花青素C1保留时间为11.340min（其中原花青素C1和原花青素C2互为旋光异构体，较难分离）。本申请使用文献《HPLC法同时测定金荞麦片中6个多酚类成分》的方法：使用C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）,流动相为乙腈与磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长220 nm测定葡萄籽提取物中原花青素C1，结果如图1-2所示。结果表明使用该方法检测葡萄籽提取物会同样不能有效分离原花青素C1和其他多酚类物质（原花青素C1保留时间为9.819min）。此外，由图1-1和图1-2可得使用文献方法实施测定葡萄籽提取物中原花青素C1均存在基质干扰，基线上抬，原花青素C1专属性不足的问题，导致无法准确定量原花青素C1，因此，需要开发一种专属性强，能准确定量葡萄籽提取物中原花青素C1含量的测定方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法，该方法可以消除葡萄籽提取物中其它多酚类物质的基质干扰，专属性强，能准确定量葡萄籽提取物中原花青素C1含量。

本发明是通过以下技术方案实现：

一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法，包括以下步骤：

（1）将葡萄籽提取物待测样品加入有机溶剂提取，得供试品溶液；

（2）取供试品溶液，采用液质联用仪进行检测，采用外标法定量计算样品中原花青素C1含量；其中色谱条件为：采用五氟苯基色谱柱、苯基色谱柱或C30色谱柱，以质量浓度为0.05-0.5%甲酸为流动相A，甲醇为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为：

流动相A得起始占比80-95%，保持1min；然后降低流动相A占比，到3min时流动相A占比70-85%；然后进一步降低流动相A占比，至8min时流动相A占比50-65%，然后保持5min；然后13.01min迅速将流动相A占比提高到80-95%，并保持3min。