[发明专利]2-羟基二十四烷酸在制备治疗肝癌药物中的应用

说明书

本发明公开了2‑羟基二十四烷酸在制备治疗肝癌药物中的应用。本发明通过试验证实2‑羟基二十四烷酸处理以剂量依赖性方式抑制肝癌细胞的增殖、克隆形成，显示2‑羟基二十四烷酸在制备治疗肝癌药物方面具有良好的前景。

技术领域

本发明涉及2-羟基二十四烷酸在制备治疗肝癌药物中的应用，属于药学技术领域。

背景技术

肝癌是我国肿瘤中发病率第四位，致死率第三位的恶性肿瘤。由于肝癌起病隐匿、侵袭性强、发病时多已属晚期，临床治疗肝癌的手段以手术治疗为主，还包括经肝动脉化疗栓塞术、射频消融及放化疗等方法。然而，以它们为靶点的预防或治疗方式大多数是失败的。通过免疫系统治疗肝癌很有潜力，但离精准治疗还有相当的距离。目前可用的靶向药物仍十分有限，为治疗带来了巨大的挑战。因此，十分有必要去探究新的治疗方法，包括药物化学治疗，研制和开发新型高效低毒的抗癌药物是治疗肝癌的重要手段。

2-羟基二十四烷酸(2-Hydroxytetracosanoic acid)(CAS No.544-57-0)是一种α-羟基极长链脂肪酸(VLCFA)，是脑苷脂和硫苷脂的组成部分。2-羟基二十四烷酸经α-氧化分解为CO₂和三羧酸，其氧化依赖于NAD+。目前，2-羟基二十四烷酸对治疗肝癌的作用尚无明确报道。

发明内容

本发明提供了2-羟基二十四烷酸在制备治疗肝癌药物中的应用。

2-羟基二十四烷酸处理以剂量依赖性方式抑制Hep3B、Huh7细胞的增殖、克隆形成，提示2-羟基二十四烷酸可以用于治疗肝癌。

附图说明

图1为实时细胞分析(RTCA)检测Hep3B对照组及Hep3B药物处理组(0μM、5μM、25μM、50μM)细胞增殖情况。

图2为实时细胞分析(RTCA)检测Huh7对照组及Huh7药物处理组(0μM、5μM、25μM、50μM)细胞增殖情况。

图3为细胞克隆实验检测Hep3B对照组及Hep3B药物处理组(0μM、25μM、50μM)克隆形成的情况。

图4为细胞克隆实验检测Huh7对照组及Huh7药物处理组(0μM、25μM、50μM)克隆形成的情况。

具体实施方式

实施例1细胞培养和药物配制

人肝癌细胞系(Hep3B、Huh7)购自美国ATCC细胞库，维持在添加10％胎牛血清(Thermo Fisher,Grand Island,NY,USA)、100μg/mL链霉素和100U/mL青霉素(Sigma,St.Louis,USA)的完全培养基DMEM(Thermo Fisher,Grand Island,NY,USA)中。将细胞保持在37℃和5％CO₂、饱和湿度，每2-3天传代一次。2-羟基二十四烷酸购自(Laroban,Solna,Sweden)，溶解在DMSO中的终浓度为10mM，使用完全培养基稀释，用于后续实验。

实施例2 2-羟基二十四烷酸对细胞增殖能力的影响

RTCA(Real-time cell analysis assay)实验：将Hep3B、Huh7细胞接种到细胞培养E-plates16板(1×10⁴个细胞/孔)中，使用x-CELLigence系统(ACEA Biosciences，SanDiego，USA)进行增殖测定，系统自动记录加药组和对照组的细胞生长指数，该值每15分钟被自动监测一次，数据输出表示如图1-2。

细胞克隆实验：将Hep3B、Huh7细胞接种到500-800个细胞/孔的12孔板中。当细胞长成肉眼可见的克隆时，用不同浓度的2-羟基二十四烷酸(0μM、25μM、50μM)处理。2-羟基二十四烷酸处理24h后，用甲醛固定细胞，结晶紫染色，计数细胞克隆数。细胞固定及染色结果如图3-4。