[发明专利]一种辣木抗氧化肽及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种辣木抗氧化肽及其制备方法和应用。所述方法包括以下步骤：步骤(1)辣木叶粉溶于水，调节pH值，超声波辅助提取，离心收集上清液，硫酸铵沉淀，透析得到辣木蛋白；步骤(2)辣木蛋白溶解调节pH，加入碱性蛋白酶酶解，灭酶离心，得到辣木蛋白酶解液；步骤(3)超滤得到辣木抗氧化肽，再采用凝胶电泳分离纯化；步骤(4)对辣木抗氧化肽进行分子量和序列鉴定。本发明以辣木叶为原料处理得到抗氧化肽，所得的辣木抗氧化肽纯度高，活性强，抗氧化作用好，对DPPH自由基、超氧自由基和羟基自由基均具有清除效果，同时，对HepG2细胞氧化损伤有明显的保护作用，可广泛用于生产营养食品、功能食品、化妆品和抗氧化药品等。

技术领域

本发明涉及抗氧化肽领域，尤其涉及一种辣木抗氧化肽及其制备方法和应用。

背景技术

辣木(Morinfga oleifera Lam.)属于辣木科辣木属，是一种多年生热带落叶乔木植物，全球约有14 个品种。原产于印度，是辣木科中生长广泛、价值极高的树种。因其根部具有辛辣味，所以取名“辣木”， 因其树干像鼓槌，又有“鼓槌树”之称。辣木富含营养素，如蛋白质、维生素、矿物元素及活性酶类物 质，因其对各种疾病具有较好的治愈能力，被称之为“奇迹树”、“医药宝箱”等。辣木对土壤条件和 降雨量有很强的适应性，生长迅速，广泛种植于亚洲、非洲的热带和亚热带地区。我国主要种植在海南、 四川、广东、广西和云南等地，其中云南种植辣木面积占全国辣木种植面积的一半以上。

辣木全株均可用，是一种具有丰富营养与独特经济价值的热带植物。辣木的蛋白质含量在不同的部 位差异性较大。新鲜的辣木叶100g含6.7g蛋白质，是菠菜(2.8g/100g)的两倍多；干辣木叶粉中的 蛋白质含量最高，100g含27.1g蛋白质，是酸奶中蛋白质含量的9倍；辣木嫩荚中蛋白质含量最低， 100g含2.5g蛋白质。叶是辣木中蛋白含量最高的器官，且已获批新资源食品，因此研究辣木叶中蛋白 质的高质化利用具有重要意义。辣木叶蛋白中，谷蛋白占80％，醇溶蛋白占14％，白蛋白占3.5％，球 蛋白占1％，是一种可与大豆蛋白媲美的优质植物蛋白。与花生、大豆、棉籽等其他植物性蛋白相比， 辣木叶蛋白的生物效价和营养价值均较高，是一种极具开发潜力的优质蛋白。

人肝癌细胞(HepG2)具有易于培养及代表性强等特点，所以经常选择化学试剂对HepG2细胞的 氧化损伤模型来评价天然抗氧化剂和植物化学物质对肝脏的保护作用，有文献以HepG2细胞建立氧化 损伤模型，研究了多肽Lys-Asp-His-Cys-His(KDHCH)对细胞内抗氧化和凋亡活性的影响，还有文献以 HepG2细胞建立氧化损伤模型，研究玉米1kDa蛋白肽组分(CPfS)在HepG2细胞中清除细胞内活性氧 (ROS)的能力和抗氧化酶调节能力。目前各国对辣木叶抗氧化研究主要集中于水提物，有文献研究表明 辣木叶提取物对甲氨蝶呤(mtx)治疗引起的氧化应激和肝肾损伤具有保护作用。

但辣木叶水提物成分复杂，不能明确有效作用成分，在深入研究和产品开发方面存在一定弊端。故 本发明以辣木叶为原料出发，提取、分离辣木叶抗氧化多肽，研究其对HepG2细胞氧化损伤作用，阐 述清楚辣木叶抗氧化作用成分及抗氧化多肽的作用机制。为生产功能食品和保健类食品提供了理论依据， 加大了辣木的利用度，对辣木生物资源综合利用具有巨大的经济价值和社会效益，有效促进辣木产业及 中国地方经济发展。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种辣木抗氧化肽及其制备方法和应用。本发明以辣木叶粉为 原料提取辣木蛋白，并通过酶解技术制备具有抗氧化活性的多肽，利用超滤技术分离，测定不同肽段抗 氧化活性，筛选抗氧化活性较高的目标肽段，并采用质谱技术对目标肽段进行序列鉴定，分离合成得到 相应的肽段，发现特定的目标肽段体外抗氧化活性均较高，对HepG2细胞氧化损伤具有明显的保护作 用。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：一种辣木抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：