[发明专利]一种酶法合成布瓦西坦手性中间体的方法在审
| 申请号： | 202210350130.2 | 申请日： | 2022-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN114908075A | 公开（公告）日： | 2022-08-16 |
| 发明（设计）人： | 郑仁朝;郑裕国;詹侃;吴哲明 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/78 | 分类号： | C12N9/78;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/02;C12P13/00;C12P41/00;C12N11/089;C12N11/14;C07C253/30;C07C255/03;C07C227/04;C07C229/08;C12R1 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 李世玉 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 合成 布瓦西坦 手性 中间体 方法 | ||
1.一种酶法合成布瓦西坦手性中间体的方法，其特征在于，所述方法为利用具有腈水解活性的酶催化3-氰基己腈水解合成布瓦西坦手性中间体(R)-3-氰基己酸的方法。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法为：以含具有腈水解活性的酶编码基因的重组基因工程菌经诱导表达后获得的湿菌体为催化剂，以3-氰基己腈为底物，以pH7-8的缓冲液或水为介质构成反应体系，在20-40℃、200-600rpm条件下反应完全后，反应液分离纯化获得(R)-3-氰基己酸。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的具有腈水解活性的酶为腈水解酶。
4.如权利要求3所述的方法，所述腈水解酶是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第140位或第175位氨基酸进行单突变或双突变获得的。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述腈水解酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.6所示。
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述反应体系中，催化剂的用量以菌体干重计为1-10g/L，底物浓度为100-300g/L。
7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述催化剂按如下方法制备：将含具有腈水解活性的酶编码基因的重组基因工程菌接种至含50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，37℃培养过夜，再以体积浓度2％接种量接种到含50μg/mL卡那霉素LB培养基中，37℃，150rpm培养至菌体浓度OD600＝0.6，加入终浓度为0.1mM的IPTG，28℃诱导培养12h后，4℃、12000rpm离心10min，收集湿菌体。
8.如权利要求2所述的方法，所述催化剂为所述湿菌体经破碎提取的粗酶、粗酶纯化后的纯酶、固定化湿菌体细胞或者固定化酶。
9.一种用于权利要求1合成布瓦西坦手性中间体的腈水解酶突变体，其特征在于，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第140位或第175位氨基酸进行单突变或双突变获得的。
10.一种含权利要求9所述腈水解酶突变体的编码基因的重组基因工程菌。
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