[发明专利]一种抗柯萨奇病毒A6型的单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及抗体技术领域，具体涉及一种抗柯萨奇病毒A6型的单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明的抗体或其抗原结合片段的重链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3具有如SEQ ID NO.1‑3所示的氨基酸序列，轻链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3具有如SEQ ID NO.4‑6所示的氨基酸序列。该抗体或其抗原结合片段兼具CV‑A6特异性和型内广谱性，能够交叉结合并中和CV‑A6不同亚型毒株，对CV‑A6感染动物具有较好的保护作用，对CV‑A6的检测、疫苗的研发、评价及临床诊断、CV‑A6感染及其相关疾病的治疗具有重要意义。

技术领域

本发明涉及抗体技术领域，具体涉及一种抗柯萨奇病毒A6型的单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，柯萨奇病毒A组6型(Cox-sackievirus A6，CV-A6)引起的手足口病在全球呈上升趋势，在部分国家，CV-A6甚至已取代EV71及CV-A16，成为引发手足口病最主要的病原体。感染CV-A6的手足口病(Hand，foot and mouth disease，HFMD)儿童主要表现为发热、皮疹和脱甲。且有研究发现，感染CV-A6的患者出现发热的比例要明显高于感染EV71和CV-A16的患者，平均体温约为38.8℃。成人亦存在感染CV-A6的现象，除出现上述症状的基础外，还会表现出诸如手掌、脚底、口周等部位出疹的现象。上述症状均为常见的HFMD临床表现，并非所有患者均存在上述症状，也存在部分患者呈现无症状感染的情况。目前，对于CV-A6的研究尚不全面，也无相应的疫苗投入使用。目前全球主要流行的CV-A6是重组进化后的变异株。CV-A6也易与其他肠道病毒共同造成混合感染。重组CV-A6病毒感染可能比非重组CV-A6感染导致更广泛的皮肤损害，并且上肢、下肢和前躯干出现的皮肤损害更加频繁。

随着基因测序技术的进步，研究发现病毒基因组中的VP1段为编码病毒主要中和表位相关的基因，因此 VP1段的同源性和中和实验的结果呈现高度的相关性。因此，基于病毒基因组VP1段的同源性比对也成为了病毒鉴定分型的金标准之一。目前尚无国际公认的CV-A6基因分型标准。以VP1编码区全基因序列(915bp) 差异＞15％以及亚型间核昔酸差异＞8％为标准，Song等(Song Y,Zhang Y,Ji T,et al.Persistent circulation ofCoxsackievirus A6 of genotype D3 in mainland of China between 2008and 2015[J].Scientific reports,2017,7(1): 1-11.)将CV-A6分为A、B、C、D四个基因型以及Bl和B2、C1和C2、D1、D2和D3基因亚型。其中基因型A包含一个单一菌株，即1949年在美国分离的CVA6原型菌株Gdula。近年来，CV-A6流行株主要为D2和D3亚型，其中D3亚型及其D3a进化分支更为普遍。

研究表明，免疫球蛋白能够较为显著地降低如γ-干扰素、白介素-6、白介素-8等细胞因子的水平。但免疫球蛋白亦会存在诸如广谱性不高、无法中和所有血清型、可能导致感染增强等局限性。目前治疗药物正着力于抗特定病毒的单克隆抗体、对病毒的进入或复制产生抑制的小分子药物等方向的研究。

单克隆抗体具有高度靶向性、低毒性等特点，是病毒感染临床诊断和治疗的重要手段，也是现代生命科学的重要工具，广泛应用于临床诊断、治疗及疫苗评价等方面。因此，开发针对CV-A6的单克隆抗体对于该病毒感染的诊断、治疗和疫苗生产具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗柯萨奇病毒A6型的抗体及其抗原结合片段以及该抗体及其抗原结合片段的制备方法和应用。

具体地，本发明提供以下技术方案：

第一方面，本发明提供抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段的重链互补决定区CDR1、 CDR2、CDR3具有如SEQ ID NO.1-3所示的氨基酸序列，和/或，所述抗体或其抗原结合片段的轻链互补决定区 CDR1、CDR2、CDR3具有如SEQ ID NO.4-6所示的氨基酸序列。