[发明专利]FruR蛋白及其筛选方法和应用

权利要求书

1.调控因子FruR蛋白突变体，其特征在于，包括以下突变之一：E173K、A18P、P129H、I144T、R312G、L3F-L170N、S75I-V160E、E72R-P128A；

调控因子FruR蛋白的氨基酸如SEQ ID NO.1所示；

优选的，所述突变包括以下突变之一：E173K、A18P、P129H；

优选的，所述突变为E173K。

2.如权利要求1所述蛋白突变体的相关生物材料，为下述(1)-(4)中的至少一种；

(1)编码调控因子FruR蛋白突变体的核酸分子；

(2)含有(1)所述核酸分子的表达盒；

(3)含有(1)所述核酸分子的重组载体或含有(2)所述表达盒的核酸分子的重组载体；

(4)含有(1)所述核酸分子的重组微生物、含有(2)所述表达盒的核酸分子的重组微生物或含有(3)所述重组载体的重组微生物。

3.如权利要求2所述的生物材料，其特征在于，(4)中，所述含有(1)所述核酸分子的重组微生物、含有(2)所述表达盒的核酸分子的重组微生物或含有(3)所述重组载体的重组微生物为克隆菌株、穿梭菌株和工程菌株的一种或多种；

优选的，所述克隆菌株为DH5α菌；

优选的，所述工程菌为W3110ΔfruR。

4.如权利要求1所述的调控因子FruR蛋白突变体或权利要求2-3任一项所述的生物材料在提高苯丙氨酸产量、制备提高苯丙氨酸产量制剂中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，将权利要求1所述的调控因子FruR蛋白的基因在缺失fruR基因的工程菌中表达；

优选的，所述缺失fruR基因的工程菌为W3110。

6.一种提高苯丙氨酸产量的试剂盒，其特征在于，包括：含有FruR蛋白突变体的核酸分子表达盒的表达载体；

优选的，还包括缺失fruR基因的工程菌；优选的，所述缺失fruR基因的工程菌为W3110。

7.如权利要求1所述的调控因子FruR^E173K蛋白突变体和权利要求2-3所述的生物材料在提高糖异生、糖酵解、乙醛酸循环、磷酸戊糖途径、PHE合成途径相关代谢酶的表达中的应用；

优选的，所述糖异生相关代谢酶包括：6-磷酸葡萄糖异构酶、果糖-1-6-双磷酸酶、磷酸甘油酸变位酶和磷酸烯醇式丙酮酸合酶中的一种或多种；

优选的，所述糖酵解相关代谢酶包括：磷酸葡萄糖异构酶、6-磷酸果糖激酶I、6-磷酸果糖激酶II和磷酸甘油酸变位酶中的一种或多种；

优选的，所述乙醛酸循环相关代谢酶包括：异柠檬酸裂解酶、苹果酸合酶和苹果酸脱氢酶中的一种或多种；

优选的，所述磷酸戊糖途径相关代谢酶包括：6-磷酸葡萄糖脱氢酶、转酮酶、5-磷酸核糖异构酶和5-磷酸核糖异构酶中的一种或多种；

优选的，所述PHE合成途径相关代谢酶包括：3-脱氧-7-磷酸庚酮酸合酶AroF、莽草酸激酶AroL、莽草酸激酶AroK、分支酸合酶、3-磷酸莽草酸酯-1-羧基乙烯基转移酶、分支酸变位酶/预苯酸脱水酶、芳香族氨基酸转氨酶中的一种或多种。

8.如权利要求1所述的调控因子FruR^E173K蛋白突变体和权利要求2-3所述的调控因子FruR^E173K蛋白突变体相关的生物材料在提高乙酰辅酶A、苹果酸、琥珀酸、延胡索酸、磷酸烯醇式丙酮酸、葡萄糖酸-6-磷酸、核糖-1-磷酸、莽草酸和苯丙氨酸中的应用。

9.如权利要求1所述的调控因子FruR^E173K蛋白突变体和权利要求2-3所述的与调控因子FruR^E173K蛋白突变体相关的生物材料在制备提高乙酰辅酶A、苹果酸、琥珀酸、延胡索酸、磷酸烯醇式丙酮酸、葡萄糖酸-6-磷酸、核糖-1-磷酸、莽草酸和苯丙氨酸制剂中的应用。

10.如权利要求1所述的调控因子FruR蛋白突变体基因序列的筛选方法，其特特征在于，方法为：

将苯丙氨酸的转录调控响应元件-报告基因、fruR突变基因表达盒转入缺失fruR基因的工程菌，通过报告基因的指示来选择可行性fruR突变基因；

优选的，所述苯丙氨酸的转录调控响应元件为色氨酸特异的转运蛋白启动子；

优选的，报告基因为荧光报告基因；更优选的，所述荧光报告基因为红色荧光蛋白。