[发明专利]一种人肿瘤特异性BRAF突变检测方法在审
| 申请号： | 202210339030.X | 申请日： | 2022-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN114807366A | 公开（公告）日： | 2022-07-29 |
| 发明（设计）人： | 石涵;龚伟;高伙妮 | 申请（专利权）人： | 上海睿璟生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京汇众通达知识产权代理事务所(普通合伙) 11622 | 代理人： | 尹全杰 |
| 地址： | 201112 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肿瘤 特异性 braf 突变 检测 方法 | ||
1.一种人肿瘤特异性BRAF突变检测方法，其特征在于：所述检测方法采用检测人BRAF基因突变的PCR试剂盒，所述PCR试剂盒包括核酸扩增试剂和对照品，所述核酸扩增试剂包括BRAF V600E反应液和BRAF V600K反应液；BRAF V600E反应液和BRAF V600K反应液中分别含有用于检测BRAF V600E和V600K突变的特异性引物和探针；BRAF V600E反应液和BRAFV600K反应液中均包含一对上游引物和下游引物，以及TaqMan荧光探针，所述BRAF V600E反应液和BRAF V600K反应液中用于检测BRAF V600E和V600K突变的特异性引物和探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：1-6所示。
2.根据权利要求1所述的一种人肿瘤特异性BRAF突变检测方法，其特征在于：所述BRAFV600E反应液和BRAF V600K反应液还包括用于对样本质量进行质控的内参引物和探针，本试剂盒中选择的内参引物为ACTB基因。
3.根据权利要求1一种人肿瘤特异性BRAF突变检测方法，其特征在于：所述BRAFV600E反应液和BRAF V600K反应液中用于扩增ACTB基因的引物和探针的核苷酸序列如SEQ IDNO：7-9所示。
4.根据权利要求3所述的一种人肿瘤特异性BRAF突变检测方法，其特征在于：所述BRAFV600E反应液和BRAF V600K反应液中包含的引物含量的浓度为：100μmol/L的引物各0.06μL，浓度为100μmol/L的探针各0.04μL。
5.根据权利要求1所述的一种人肿瘤特异性BRAF突变检测方法，其特征在于：所述核酸扩增试剂还包括BRAFPCR MIX，BRAFPCR MIX中包括dNTP、KCl、Tris-HCl、MgCl 2和Taq酶；该MIX为2×工作液，配制时加入体积为总体系量的一半。
6.根据权利要求1所述的一种人肿瘤特异性BRAF突变检测方法，其特征在于：所述检测人BRAF基因突变的PCR试剂盒还包括阳性对照和阴性对照，其中，阴性对照为工艺用水，阳性对照为突变质粒和野生型细胞株DNA混合物。
7.根据权利要求6所述的一种人肿瘤特异性BRAF突变检测方法，其特征在于：所述突变质粒包含的BRAF基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11所示。
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