[发明专利]一种法夫酵母代谢产物的分析方法

说明书

本发明公开了一种法夫酵母代谢产物的分析方法，其包括以下步骤：从法夫酵母发酵液中提取代谢物作为样品；对样品进行液相色谱‑电喷雾电离‑三重四级杆飞行时间质谱联用检测，获得质谱数据；在MS‑Dial选择液质代谢组学数据库进行下载；通过MS‑Dial对上述步骤的质谱数据进行分析，获得总离子峰图；将上述步骤的总离子峰图与上述步骤的数据库进行鉴定法夫酵母的代谢产物。该方法提高了检测靶向性的准确度，提高了检测灵敏度，无需同位素示踪，操作简单，适用性广泛。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种法夫酵母代谢产物的分析方法。

背景技术

法夫酵母是Phaffia属的微生物，是一种极其重要的工业菌株，能够合成多种具备生物活性的天然产物。法夫酵母所产虾青素、脂肪酸、岩藻黄质、叶黄素等在食品保健、医疗、美容等方面具有较高的利用价值。

代谢物的定性一直是代谢组学的一大难点，由于法夫酵母代谢物复杂，传统微生物代谢数据库样本较少，导致法夫酵母代谢物定性不准确以及假阳性较高。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提出一种法夫酵母代谢产物的分析方法，该方法提高了检测的靶向性，克服了一般方法分析定性不精准的缺点，提高了检测灵敏度，无需同位素示踪，操作简单，适用性广泛。

为了实现上述目的，本发明的实施例在一方面提出了一种法夫酵母代谢产物的分析方法，其包括以下步骤：

(1)从法夫酵母发酵液中提取代谢物作为样品；

(2)对样品进行液相色谱-电喷雾电离-三重四级杆飞行时间质谱联用检测，获得质谱数据；

(3)在MS-Dial选择液质代谢组学数据库进行下载；

(4)通过MS-Dial对步骤(2)的质谱数据进行分析，获得总离子峰图；

(5)将步骤(4)的总离子峰图与步骤(3)的数据库进行鉴定法夫酵母代谢产物。

根据本发明实施例的一种法夫酵母代谢产物的分析方法，该方法使用LC-Qtof-MS液质联用技术进行质谱，再将质谱数据转入MS-Dial软件，选择All public MS/MS数据库对数据，通过质谱数据与数据库匹配进行分析，提高了检测的靶向性，克服了一般方法分析定性不精准的缺点；同时根据特异子离子的丰度对代谢物进行定量检测，极大提高了检测灵敏度，为研究法夫酵母天然活性代谢产物提供新思路新方法。

另外，根据本发明上述实施例提出的一种法夫酵母代谢产物的分析方法，还可以具有如下附加的技术特征：

可选地，步骤(5)中，通过总离子峰图中的质谱峰和保留时间与数据库进行匹配鉴定法夫酵母代谢产物。

可选地，步骤(2)中，液相色谱的操作条件是：进样量5～10μL，柱温25～35℃，流速0.2～0.4mL/min；色谱流动相A：0.1％甲酸水，B：乙腈；色谱梯度洗脱程序如下：0～1min，90％A；1～3min，A从90％线性变化至50％；3～6min，A从50％线性变化至10％；6～9min，A维持在10％；9～11min，A从10％线性变化至50％；11～12min，A从50％线性变化至90％。

可选地，步骤(2)中，电喷雾电离是采用正离子模式和负离子模式进行检测。

可选地，步骤(2)中，ESI源条件为：毛细管电压：3～3.30kV；采样锥：40；震源偏移：80；源温度：100℃；脱溶剂温度：250～300℃；气帘气流量：50L/H；脱溶剂气流量：59850L/H；正离子扫描m/范围：50～1200Da；负离子扫描m/z范围：50～1200Da。

可选地，还包括步骤(6)使用L-谷氨酸、咪唑、葡萄糖、蔗糖标准品对仪器和软件校准。