[发明专利]一种抗虫性的苏铁毒蛋白基因、表达载体及应用

权利要求书

1.一种抗虫性的苏铁毒蛋白基因，其特征在于，所述抗虫性的苏铁毒蛋白基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.6。

2.一种如权利要求1所述的抗虫性的苏铁毒蛋白基因构建得到的植物表达载体，其特征在于，所述植物表达载体的构建方法包括：

线性化载体制备：使用限制性内切酶BstBI和MluI双酶切VM062-3*FLAG载体，使环状载体线性化；

带有同源臂的目标序列扩增：

以正向引物：

5’-gggcggtaccccgggttcgaaATGGTTATGGTAATTGACTATCCAAGTC-3’；反向引物：

5’-cactagttaattaagacgcgtCTATGTCATGCGTAGAATGGCCC-3’为引物，对苏铁毒蛋白基因进行PCR扩增；

载体酶切产物与PCR产物的检测与回收：琼脂糖凝胶电泳检测目的基因片段与载体酶切产物，使用Quick Gel Extraction Kit回收目的片段；

胶回收产物重组：使用-Basic Seamless Cloning and Assembly Kit进行同源重组，反应体系如下：2×Basic Assembly Mix 5μL；酶切载体XμL；PCR产物YμL；将灭菌水加入至10μL，10μL反应体系中，载体与各个插入片段加入量均在0.01～0.25pmols，载体与各个插入片段的最佳摩尔比为1：2；轻轻混合，50℃反应15min，进行转化；

测序鉴定：经菌落PCR和质粒PCR筛选阳性克隆，进行测序分析。

3.一种如权利要求1所述的抗虫性的苏铁毒蛋白基因编码的蛋白质，其特征在于，所述蛋白质的氨基酸序列为SEQ ID NO.11。

4.一种如权利要求1所述的抗虫性的苏铁毒蛋白基因的杀虫应用或杀虫剂制造，应用范围为棉铃虫、小菜蛾、草地贪夜蛾的植物害虫。

5.一种应用如权利要求1所述的抗虫性的苏铁毒蛋白基因的植物的抗虫方法，其特征在于，所述植物的抗虫方法包括：

将含有目标序列的植物表达载体导入到植物细胞内，并由此获得对害虫有抗性或杀伤能力的转基因植物及其后代，包括种子和任何部分的植物组织；或者通过同源或异源表达的方法获得该蛋白施用于植物，害虫为棉铃虫、小菜蛾、草地贪夜蛾的植物害虫。