[发明专利]由长链非编码RNA LINC01234编码的小肽与应用

说明书

本发明提供由长链非编码RNA LINC01234编码的小肽与应用。长链非编码RNA LINC01234中包含的LINC01234ORF区域，能够编码表达一种新的人类小肽MBOP，且该小肽在结直肠癌和宫颈癌中高表达，并主要定位在细胞质中。小肽MBOP能调控结直肠癌细胞迁移和增殖过程，因此可以作为诊疗结直肠癌和宫颈癌的新的分子分型标记物和药物靶点。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域和医学领域，具体涉及一种由长链非编码RNALINC01234编码的小肽MBOP(MEK-binding oncopeptide)，产生该小肽的抗体的方法，以及该小肽的用途。

背景技术

高通量测序技术的不断发展，使研究者们注意到了非编码RNA(noncoding RNA，ncRNA)的存在，以及这些ncRNA在细胞迁移、增殖、发育和免疫等方面发挥的多种调节作用。近年来，随着核糖体测序，质谱测序等技术的不断更新，研究者们发现，最初被认为不具有编码功能的ncRNA中存在着可编码小肽的开放阅读框(open reading frame，ORF)。长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)是长度超过200个核苷酸的ncRNA，是近年来被鉴定出具有较强编码小肽潜力的一类功能性RNA分子。LncRNA编码的小肽已经被报道能够在结直肠癌，三阴性乳腺癌和肝癌等多种肿瘤疾病的发生发展方面发挥重要的调节作用(Cancer Lett.2021Jan 28；497:89-99.)。因此，本发明结合编码能力预测数据库和体内外生物学实验，寻找出具有ORF的lncRNA，并对由该ORF编码的小肽进行表达水平、亚细胞定位方面的表征，以及其在肿瘤细胞中的生物学功能方面的研究，以期为临床肿瘤疾病的诊断提供新的标记物(biomarker)，为治疗提供新的药物靶标。

发明内容

针对肿瘤疾病分子分型解析不够深入的现状，本发明的一个目的是提供由长链非编码RNA LINC01234编码的小肽。

长链非编码RNA LINC01234的开放阅读框LINC01234ORF的核苷酸序列如SEQ IDNo:1所示，该编码区产生的小肽MBOP的氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。

基于一对人结直肠癌组织的氨基酸测序结果，在结直肠癌的癌组织中测到的氨基酸序列如SEQ ID No:3所示，对应的癌旁组织中测到的氨基酸序列如SEQ ID No:4所示。

基于所述的SEQ ID No:2的68-82氨基酸(amino acid，aa)片段作为抗原，通过免疫反应产生的检测MBOP含量的抗体。

所述的编码小肽的核苷酸序列LINC01234ORF的过表达质粒pORF-FLAG。该过表达小肽MBOP的质粒pORF-FLAG构建方法，包括以下步骤：分析序列SEQ ID No:1和质粒载体pcDNA3.1+的酶切位点分布情况，筛选出限制性内切酶BamH I和EcoR I；向目的基因SEQ IDNo:1的末端加上一个FLAG标签，并按照内切酶的酶切位点设计引物，合成适用于质粒构建的目的片段；用限制性内切酶对目的片段和pcDNA3.1+载体进行酶切、纯化、连接、转化，即得到过表达MBOP的过表达质粒。

本发明的另一个目的是提供所述小肽在作为诊疗结直肠癌和宫颈癌的标记物中的应用。

本发明的再一个目的是提供所述小肽在制备靶向MBOP的抗结直肠癌和宫颈癌的药物中的应用。

本发明所述小肽MBOP在结直肠癌和宫颈癌细胞系中的表达高于正常结肠上皮细胞中的表达。

本发明所述小肽MBOP在结直肠癌组织中的表达高于配对的癌旁组织中的表达。

本发明所述小肽MBOP在结直肠癌细胞中的亚细胞定位为细胞质。

本发明所述小肽MBOP可以促进结直肠癌细胞HCT116和HCT15的迁移和增殖功能。

本发明具有如下优点：