[发明专利]一种碱裂解法提取细菌质粒的试剂盒及其方法有效
| 申请号： | 202210317719.2 | 申请日： | 2022-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN114657174B | 公开（公告）日： | 2023-07-25 |
| 发明（设计）人： | 黄国文 | 申请（专利权）人： | 湖南科技学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 吴波 |
| 地址： | 425199 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 裂解 提取 细菌 质粒 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种碱裂解法提取细菌质粒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括细菌悬浮液和质粒复性液；
所述细菌悬浮液的组成成分包括：50-120mmol/L葡萄糖、10-30mmol/L EDTA、20-30mmol/L Tris-HCl、1.5-3.0mol/L LiCl、0.5-1.5mol/L NH4Ac；所述质粒复性液的组成成分包括：0.8-3mol/L KAc和3.5-4.5mol/L异硫氰酸胍。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括细菌裂解液，所述细菌裂解液的组成成分包括0.2mol/L NaOH和1%SDS。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括洗涤液，所述洗涤液的组成成分包括70%-80%乙醇水溶液。
4.一种提取细菌质粒的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
利用细菌悬浮液悬浮细菌后加入细菌裂解液进行变性裂解，然后加入质粒复性液进行质粒复性，离心，所得上清液转入硅胶柱中，经洗涤液洗涤，即得所述质粒；
所述细菌悬浮液的组成成分包括：50-120mmol/L葡萄糖、10-30mmol/L EDTA、20-30mmol/L Tris-HCl、1.5-3.0mol/L LiCl、0.5-1.5mol/L NH4Ac；所述质粒复性液的组成成分包括：0.8-3mol/L KAc和3.5-4.5mol/L异硫氰酸胍；所述细菌裂解液的组成成分包括0.2mol/L NaOH和1%SDS；所述洗涤液的组成成分包括70%-80%乙醇水溶液。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，洗涤后的硅胶柱利用30-50µL 60℃双蒸水洗脱即得所述质粒。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述细菌包括大肠杆菌DH5α、TOP10、JM109或农杆菌EHA105，GV3101。
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